[发明专利]固定化乳糖酶生产方法

摘要

本发明涉及的是一种固定化乳糖酶生产方法。它包括了(1)脆壁克鲁维酵母菌悬液的制备，(2)酶预破壁处理，(3)冻融破壁，(4)高压匀浆机终极破壁，(5)制备固定化载体溶液，(6)制备乳糖酶固定化载体溶液，(7)制备固定液和(8)固定化处理等过程。用固定化乳糖酶生产低乳糖奶，其特点是可以进行连续处理，固定化酶不会随液体奶流失，可以回收重复使用，降低乳糖奶的生产成本。

主权项

1、固定化乳糖酶生产方法，其特征是：(1)脆壁克鲁维酵母菌悬液的制备：将培养成熟的脆壁克鲁维酵母细胞经10000r/min高速离心，获得新鲜活性菌体细胞，将菌体细胞用无菌水洗涤1-2次，然后用无菌水配制成细胞菌悬液，细胞浓度为5.0％-40.0％；(2)酶预破壁处理：取上述菌悬液500mL，加入蛋白酶和β-葡聚糖酶，蛋白酶用量1.0-150.0u/g湿菌体，β-葡聚糖酶用量1.0-100u/g湿菌体，pH6.0-7.0，30℃-65℃保温1-6小时；(3)冻融破壁将经酶处理后的细胞悬液取出，置于-20℃--50℃温度下快速冷冻，使其彻底冻结，再将冷冻的细胞置于40℃-75℃迅速融化，得到冻融细胞悬液；(4)高压匀浆机终极破壁将冻融的细胞悬液置于液体剪切破碎装置高压匀浆机中进行二次破壁，进口处的温度维持在20℃-45℃，出口处的温度不要高于50℃，压力维持在30MPa-120MPa，得到无细胞结构的活性乳糖酶溶液，称为Ls溶液；(5)制备固定化载体溶液称取3.5g-20.0g聚乙烯醇(PVA)，0.5g-10.0g海藻酸钠，加入100mL蒸馏水，搅拌10分钟，静止浸泡2-24小时，置于121℃温度下灭菌20分钟，冷却至10℃-35℃，此溶液为Ps溶液；(6)制备乳糖酶固定化载体溶液量取上述Ls溶液和Ps溶液，Ps∶Ls按1∶1-1∶4，在无菌条件下彻底搅拌均匀，此溶液称为Ps-Ls溶液；(7)制备固定液称取硼酸1.0-4.0g，氯化钙0.5-6.0g，加入100mL水，加热搅拌使其溶化，然后，121℃温度灭菌20分钟，冷却至10℃-35℃，此溶液为硼酸-氯化钙混合液；(8)固定化将Ps-Ls溶液置于成型机中，缓缓地滴入硼酸-氯化钙溶液中，Ps-Ls溶液与硼酸-氯化钙溶液的比例按1∶1-1∶8，经2-8小时的硬化，捞出用无菌水洗涤两次，即制得固体固定化乳糖酶。