[发明专利]超敏化学发光酶免法测定人肿瘤可溶性蛋白sp185Her－2

摘要

本发明一种用超敏化学发光酶联免疫吸附定量测定人Her－2/Neu癌基因可溶性产物sp185^Her－2的方法。使用奥地利Bender MedSystemsGmbH公司的一对抗sp185^Her－2单克隆抗体，采纳固相双位点夹心式酶联免疫吸附技术，用抗sp185^Her－2单克隆抗体包埋小容量微孔后，样本中sp185^Her－2结合在包埋抗体上；加入辣根过氧化酶(HRP)联结的单克隆抗sp185^Her－2抗体后，它和已被第一抗体捕获的sp185^Her－2结合；孵育后洗除未结合的抗sp185^Her－2酶联结抗体；加入辣根过氧化酶超敏化学发光底物后；通过化学发光仪测定425nm处发光量来定量样本中sp185^Her－2浓度。本法检测线性范围0－10ng/mlsp185^Her－2(R²＝0.9999)，最低检测限度40.15pg/ml sp185^Her－2。本发明改进Bender MedSystems ELISA，采用小容量微孔板，在不影响反应敏感性的前提下，减少了包埋抗体和其他反应试剂的使用量，加快了反应速度；采用超敏化学发光底物和化学发光仪，加宽了检测线性范围，使检测限度下移，提高了反应敏感性。人血清Her－2/Neu癌基因可溶性产物sp185^Her－的测定，实时观察乳腺癌患者术后sp185^Her－含量的变化，有助于预后的临床评估。本发明为进一步研发临床适用的诊断试剂盒奠定了基础。

主权项

1.一种用超敏化学发光酶联免疫吸附法定量测定人Her-2/Neu癌基因可溶性产物sp185Her-2 的方法，其特征是采用固相双位点夹心式酶联免疫吸附技术，用抗sp185Her-2单克隆抗体包埋小容量微孔后，样本中sp185Her-2结合在包埋抗体上；加入辣根过氧化酶(HRP)联结的单克隆抗sp185Her-2抗体后，它和已被第一抗体捕获的sp185Her-2结合；孵育后洗除未结合的抗sp185Her-2酶联结抗体；加入辣根过氧化酶超敏化学发光底物后；通过化学发光仪测定425nm处发光量来定量样本中sp185Her-2浓度。