[发明专利]罗布麻DNA解旋酶基因APDH1序列及其克隆与应用

摘要

本发明涉及罗布麻DNA解旋酶基因APDH1的克隆、重组、耐盐性功能分析及其转基因耐盐碱棉花的选育，属于分子生物学和生物技术领域。利用抑制差减杂交技术，构建盐胁迫和正常条件下罗布麻mRNA正向差减cDNA文库，对从差减文库中筛选的阳性cDNA克隆进行酶切、PCR与逆向Northern斑点杂交鉴定、DNA测序以及核苷酸序列同源性比较，获得一系列盐诱导表达的cDNA序列，其中有一段序列为DNA解旋酶基因的中间片段。然后进行3′和5′末端快速扩增获得编码罗布麻DNA解旋酶全长cDNA，将其命名为APDH1。进一步，构建正义表达载体，转化棉花。获得的转基因棉花植株可以在0.45％的盐碱地正常出苗、开花和吐絮，而非转基因棉花则不能出苗或者在生长过程中死亡。

主权项

1.一种克隆的罗布麻DNA解旋酶基因APDH1，其特征在于它具有下述所示的核苷酸序列：1 attcttgtgc gaaaaccttt cttatccacc ttatctatat ctctccatcc tcaacattat61 agctcggtca acaagcatgg ccacaactac ttcggggccg gctaatcgta ggggaaccgt121 aatcgacgat aagctggtct ttgaaacgac cgaaggagtc gaggccatta cctccttcaa181 tggcatgggc ataaaagagg atttactccg tggtatctat gcttacggat tcgaaaagcc241 ttccgctata caacagcgag cggtaatgcc tatcatacag ggtcgagatg taattgcaca301 agctcaaagt ggtacgggta agaccagcat gattgccctt acagtatgcc aggtagttga361 tacttcggtg cgtgaagtcc aagcattaat actgtcacct actagagagc tggcgactca421 gacagaaaag gtaattctgg caattggtga tcatataaat attcaagctc atgcatgcat481 aggtggcaat tctgtcggtg aagatatacg gaaactagag catggtgtac acgtcgtcag541 tggaactcca ggccgtgtgt gtgacatgat taaaaggcga agtttgcgaa ctcgagcaat601 caagttactt attctcgatg aaagtgatga aatgttaggc agaggtttca aagatcagat661 atatgatgtc tacagatatc tgcctccgga cctacaggta tgcttgatat cagctaccct721 tccacatgaa attctcgaga tgacttccaa gtttatgact gaacctgtca agatcctagt781 gaaacgagat gaattgactc tggaggggat caagcagttc tttgtagccg tagagaagga841 agattggaag tttgatacac tctgtgacct ctatgacaca ctcacaataa cactggcggt901 gatattttgc aatacgaagc gtaaggtcga ctggttaagt gaaaaaatgc gaagcaacaa961 tttcacagtg tctgtaatgc acggagacat gccacagaag gagcgagatg ctattatgaa1021 tgaatttcga tctggtgcaa cccgagtttt gattacaaca gatgtatggg caagagggct1081 agatgttcaa caggtatcac ttgtaataaa ttatgaccta cctaataaca gagagctcta1141 catacatcgc ataggaaggt ctggtcgatt tggtcgtaag ggagtagcta ttaattttgt1201 aaagtccgac gacatcaaga ttctgagaga tattgagcag tattactcta cgcagataga1261 tgaaatgcct atgaatgttg ctgatctaat ttaaaaaagg ggcatgattt cggatgggtt1321 ttttgtgata gtttagggtt tttggccttt ccttaggctt aaaagggccc ctttaagtct1381 gtcagtctga tcgtactagc tttttaaggg ccctttccgt cgctgaatag tctagtcagt1441 gtgtcagtca gtcgatcgta gctagtcagt catgtgttaa taaaggttta gtcgttgtta1501 aacgtcgccc ggttatatgc taagtcatgt ctaaaccacc catttcccgg cgcgctagct1561 agtcagctat agtcagtcat cgttaaaaca taaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa1621 a