[发明专利]一种鼠李糖脂的制备方法

摘要

本发明公开了一种鼠李糖脂的制备方法。它包括以下步骤：菌种筛选，对取自油田污水或油泥的样品浸泡预处理后接入增殖培养基，划线法接种于血液琼脂平板上培养，挑取单菌落，并接种于蓝色琼脂平板上培养，挑取出现蓝色晕圈的菌落接入斜面作菌种保藏；将初筛菌株接入发酵培养基中发酵后测定其排油活性、乳化性能及发酵液表面张力，然后选取目的菌株；发酵工艺优化，将经筛选的菌株进行发酵，在发酵过程中进行发酵培养基优化、发酵条件优化、菌种优化得到鼠李糖脂发酵液；对鼠李糖脂发酵液进行提取得到鼠李糖脂粗产品。本发明具有所筛选菌株的产量高、重烃降解效果明显、克服仅依靠生物表面活性剂溶血性进行判断的缺点、提高了筛选准确度等显著优点。

主权项

1、一种鼠李糖脂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1.1在25～35℃的环境温度下菌种的筛选：对取自油田污水或油泥的样品浸泡预处理后接入增殖培养基培养22～24小时，经增殖培养的培养液采用划线法接种于血液琼脂平板上培养24～72小时，挑取溶血圈的单菌落，并接种于蓝色琼脂平板上培养24～120小时，挑取出现蓝色晕圈的菌落接入斜面作菌种保藏；将保藏在斜面培养基中的初筛菌株接入发酵培养基中发酵72～120小时后测定其排油活性、乳化性能及发酵液表面张力，然后选取目的菌株，并存种；1.2发酵工艺的优化：将经筛选选取的菌株进行发酵，在发酵过程中首先进行发酵培养基优化，对发酵过程的碳源、氮源、无机盐及各基质用量进行优化选择，通过考察菌株在各条件下的鼠李糖脂产量、发酵液表面张力变化、发酵周期长短、发酵成本和发酵过程控制难易度确定最优发酵培养基；其次，进行发酵条件优化，对发酵温度在20～50℃、pH＝3～11、溶解氧、搅拌速度和生物反应器装液量以及种子培养、接种量1％～10％的条件进行优化；最后进行菌种优化得到鼠李糖脂发酵液；1.3对鼠李糖脂发酵液的提取：将发酵液经离心除菌体后，过滤除去不溶性杂质和剩余液蜡，溶液pH＝6.0～6.5，加入萃取溶剂，搅拌、萃取分液，合并有机相，用等体积水洗，用旋转蒸发仪减压蒸除溶剂，得到鼠李糖脂粗样品。