[发明专利]鼻咽癌相关基因UBAP1编码蛋白的纯化及其抗体的制备

摘要

一种鼻咽癌相关基因UBAP1编码蛋白的纯化及其抗体的制备，以获得用于鼻咽癌特异性诊断的UBAP1基因诊断试剂盒，属于蛋白质工程领域。本发明采用多聚酶链式反应(PCR)方法克隆UBAP1基因蛋白编码序列，构建该基因的融合表达质粒，导入BL21的大肠杆菌中，IPTG诱导其在大肠杆菌中的表达，采用谷胱甘肽亲和层析系统纯化融合蛋白，采用多点注射法制备兔多抗，骨髓瘤细胞融合法制备小鼠来源性的抗UBAP1单抗，进而建立检测UBAP1表达水平的免疫组化法以特异地诊断鼻咽癌。

主权项

1.一种鼻咽癌相关基因UBAP1编码的蛋白的纯化，采用多聚酶链式反应方法克隆UBAP1基因蛋白编码序列，构建该基因的融合表达质粒，导入大肠杆菌JM109，IPTG诱导其在大肠杆菌中的表达，用GST融合蛋白纯化试剂盒纯化融合蛋白，本发明据原核表达载体pGEX-4T-2的GST阅读框架设计引物，使UBAP1基因的编码区阅读框与GST的阅读框架一致；其特征在于：以含UBAP1基因的质粒为模板(0.1μg)，加入上述引物各10pmol进行扩增，回收PCR产物条带；用BamH I、Xhol I分别双酶切PCR回收产物及pGEX-4T-2载体，产生匹配的粘末端。小胶回收试剂回收线性的1.5kb的载体，UBAP1编码区片段。将pGEX-4T-2载体与UBAP1基因连接，构建成符合读框的GST-UBAP1融合基因。用含融合基因的pGEX-4T-2质粒转化大肠杆菌BL21，小量制备质粒DNA，BamH I和Xhol I酶切鉴定是否含插入片段，含插入片段的阳性克隆质粒DNA纯化后用DNA自动测序仪测序。