[发明专利]一种蚕豆离体培养方法

摘要

本发明公开的一种蚕豆离体培养方法，包括获取无菌种子苗、构建克隆3代群体、环境胁迫筛选、生根繁殖培养等步骤。培养时所使用的发芽培养基和恢复培养基是以MS培养基为基本培养基，其中添加30g/L蔗糖、6.0g/L琼脂，pH5.8；增殖培养基则在发芽培养基的基础上添加0.5mg/L 6－BA、0.01mg/L NAA、0.5mg/L MET、800mg/L CH、1mg/L PVP、0.5g/L AC；生根培养基是以MS培养基为基本培养基，其中添加1.0mg/L NAA、0.5g/L AC并在121℃高温高压灭菌。采用本发明的培养方法，其苗与种子苗没有差异，茎秆粗壮，叶色浓绿，长势良好。

主权项

1、一种蚕豆离体培养方法，包括以下步骤：1)、获取无菌种子苗：选择饱满、均匀的蚕豆种子，放置于70％的酒精中1分钟后，再用饱和的漂白粉溶液浸泡10分钟，用无菌水冲洗5-6次。放在铺有无菌纱布的磁盘中，倒入添加5mg/L GA3的无菌水浸泡12h，待种子完全吸胀后，再用饱和的漂白粉溶液浸泡10分钟，用无菌水冲洗5-6次，采用胚根向上放置方式接种到无激素的发芽培养基上，在23±1℃、光强18001x、每天光照12h/黑暗12h的光周期下培养；2)、构建克隆3代群体：当芽长出2-3cm时，将芽切下转移至增殖培养基上，连续克隆三代；3)、环境胁迫筛选：将克隆苗按照下面的a)步骤或b)步骤进行环境胁迫筛选：a)、45℃ 1h、2h，在光照培养箱中进行；b)、紫外灯照射，在超净工作台上将培养瓶的盖子打开，将苗暴露在20w的紫外灯下照射，高度60cm，时间设置为1h和2h；4)、生根繁殖培养：环境胁迫处理结束后，将无菌苗接种至无激素的恢复培养基培养，21天后统计存活率，并将存活的植株转移到生根培养基生根。上述发芽培养基和恢复培养基是以MS培养基为基本培养基，其中添加30g/L蔗糖、6.0g/L琼脂，pH 5.8；增殖培养基则在发芽培养基的基础上添加0.5mg/L 6-BA、0.01mg/LNAA、0.5mg/L MET、800mg/L CH、1mg/L PVP、0.5g/L AC；生根培养基是以MS培养基为基本培养基，其中添加1.0mg/L NAA、0.5g/L AC并在121℃高温高压灭菌。