[发明专利]马抗血清的制备纯化工艺

摘要

本发明涉及一种马抗血清(抗毒素)的制备、纯化工艺，该工艺包括免疫血浆消化处理、两次加硫酸铵的沉淀和第三次的吸附沉淀、浓缩等步骤，本发明采用离子交换剂柱层析吸附纯化；可除去F(ab) ₂片段以外的酸性杂蛋白，如Fc片段、聚集物、小分子肽等。从而有效提高马抗血清(抗毒素)制剂的纯度，降低马血清制剂过敏反应率和血清病的发生。

主权项

1、一种马抗血清的制备纯化工艺，该工艺包括下述步骤：(1)消化步骤：用免疫血浆消化工艺将免疫血浆消化；(2)第一次沉淀过滤处理步骤：将上述处理的消化液中加入硫酸铵形成混悬液，并调节pH值为4.8-5.2，然后将混悬液加温并保持，再降温，过滤收集上清液，废弃沉淀；(3)第二次沉淀过滤处理步骤：将上述(2)步的上述清液pH值调整为7.0-7.4，加入硫酸铵进行第二次沉淀，静置后过滤取沉淀物，弃上清液；(4)明矾沉淀：即将上述(3)步的沉淀物稀释至蛋白含量不超过2g/L，再调整稀释液pH值为7.7-7.9，加明矾进行沉淀，静置后过滤取上清液，沉淀物废弃；(5)将上述上清液用硫酸铵沉淀法或超滤法浓缩制得抗血清原液；(6)离子交换剂吸附纯化：1)用阴离子交换剂装柱，用pH值为7.0±0.2，0.15M NaCl，10mM磷酸盐缓冲液进行平衡；2)将用0.45μm的膜进行澄清过滤的抗血清原液通过上样泵加入柱体上部，用pH值为7.0±0.2，0.15M NaCl，10mM磷酸盐缓冲液洗柱，流速为3ml/min，收集穿透液，酸性杂质被吸附在层析介质上，F(ab)2流穿；3)用2M NaCl清洗柱体后，用20％乙醇洗柱，使介质浸泡其中保存；4)将穿透液超滤浓缩调整抗血清浓度，调整蛋白含量不超过170g/L，按调整后制品总量，加氯化钠使最终含量为750-950g/L，加三氯甲烷使最终含量不超过5g/L或硫柳汞0.1g/L或间甲酚2.5g/L为防腐剂，调节pH至6.0-7.0，用0.22um滤膜除菌过滤。