[发明专利]苦瓜皂甙的测定方法

摘要

本发明公开了一种苦瓜皂甙的测定方法，是由如下步骤组成：(1)苦瓜皂甙对照品的制备：①苦瓜皂甙粗品的提取：将苦瓜籽粉，加入纤维素酶，微波处理，过滤收集上清液，过中空纤维膜，取透过液，过截留分子量6000的中空纤维膜，取透过液浓缩，得苦瓜皂甙粗提液；纯化，干燥，得到苦瓜皂甙粗品；②HPLC分离制备前苦瓜皂甙的预纯化；③HPLC分离制备；④HPLC分离制备后产品的重结晶(2)供试品中苦瓜皂甙含量的测定：采用分光光度法，在468nm的波长处测吸光度，计算，即得，本发明苦瓜皂甙的测定方法，为苦瓜类保健食品及中草药苦瓜皂甙的标准化定量分析提供标准对照品，为苦瓜皂甙含量的测定提供了一种准确可靠的方法。

主权项

1.一种苦瓜皂甙的测定方法，其特征是由如下步骤组成：(1)苦瓜皂甙对照品的制备①苦瓜皂甙粗品的提取将晒干粉碎过60目筛后的苦瓜籽粉，按重量比1∶15～40的比例加入蒸馏水，再按2～6mg/ml加入纤维素酶，30℃～60℃，作用1～3h，再用500～5000W微波处理10～60min，过滤，离心，收集上清液，过0.2μm的中空纤维膜，取透过液，过截留分子量6000的中空纤维膜，取透过液于旋转蒸发器中，60℃，0.05～0.07Mpa，减压浓缩至原体积的1/5～1/10，得苦瓜皂甙粗提液；向所述苦瓜皂甙粗提液中加入0.5～2倍体积的石油醚或乙醚，萃取1～3次，去除脂溶性杂质，取下层水相；再用0.5～2倍体积的正丁醇萃取1～3次，去除亲水性杂质，取正丁醇相，用无水硫酸钠脱水后，真空干燥，得到棕黄色糖浆状苦瓜皂甙粗品；②HPLC分离制备前苦瓜皂甙的预纯化将所述苦瓜皂甙粗品10g溶于400ml蒸馏水中，上大孔吸附树脂柱层析，用体积百分比为60％～80％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，将洗脱液用氢氧化钾水溶液或氢氧化钠水溶液调pH至10，3℃～5℃放置8-12小时，过滤，滤液用无水Na2SO4脱水，回收溶剂后，滴加乙醚精制得白色晶体为预纯化的苦瓜皂甙；③HPLC分离制备将所述预纯化的苦瓜皂甙晶体溶于重蒸水，配成5mg/ml的水溶液，以HPLC分析，在192nm检测，色谱条件：色谱柱：C18；10μm；7.8mm ID×150mm；流动相：乙腈∶水＝35∶65，等度洗脱；流速：4ml/min；④HPLC分离制备后产品的重结晶HPLC分离后，收集液60℃，0.05Mpa，浓缩4h得苦瓜皂甙对照品晶体；(2)供试品中苦瓜皂甙含量的测定①对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的苦瓜皂甙对照品适量，加重蒸水溶解，制成每1ml含0.1mg的溶液；②供试品溶液的制备精密称取供试品适量，加适量蒸馏水破碎，再按4mg/ml加入纤维素酶，45℃下作用2h，再用750W微波处理45min，过滤，离心，收集上清液，过0.2μm的中空纤维膜，取透过液，过截留分子量6000的中空纤维膜，取透过液于旋转蒸发器中60℃，0.05～0.07Mpa减压浓缩至原体积的1/5～1/10，移入容量瓶中用水定容至刻度，摇匀，即得；③供试品中苦瓜皂甙含量的测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1ml，分别置于具塞试管中，水浴挥去溶剂，各精密加入新配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，在60℃水浴中加热15min，冷却，加冰醋酸5ml，摇匀，放置15min，以水溶液随行作空白试验，照分光光度法，在468nm的波长处测吸光度，计算，即得。