[发明专利]细胞内生基因活性化的优化方法

摘要

本发明涉及细胞内生基因表达的优化方法。首先，涉及一种改变内生存在于真核细胞中的目标基因的表达的方法，其中，借助于同源重组作用，把一种异源表达控制序列引入到细胞的基因组中，而且该方法中还包括使插入的外来DNA的、部位特异重组酶介导的切除，以及用其他的异源表达控制序列或/和扩增标记基因代替之；本发明还涉及把一个或多个在其上结合存在一个激活因子蛋白质或一个激活蛋白质复合物例如一个缺氧诱导因子(HIF)上的核酸序列通过同源重组引入到一个真核细胞的基因组内，以便改变目标基因的表达。本发明还涉及一个通过对报道基因表达的确定，测定在5’部位或3’部位上未编码的核酸片段对目标基因表达的影响的方法。此外，本发明还涉及一种含有重组酶－目标序列的、DHFR－负真核细胞的制备方法，以及插入在该重组酶－目标序列中的核酸序列的表达。

主权项

1、一种改变内生存在于真核细胞中的核酸序列表达的方法，其特征是，(a)使一种载体转入该细胞，包括(i)至少一种能结合激活蛋白质的核酸序列，(ii)一个正的选择标记基因，(iii)置于序列(i)与(ii)两侧的DNA序列，它们与细胞基因组中的一个核酸截段同源，以便可形成同源的重组，(b)在一定的条件下培养该转入了的细胞，在该条件下可使载体进行同源的重组，(c)获得按步骤(b)制得的细胞。