[发明专利]表达人类反义受磷蛋白基因的重组腺相关病毒及其制备方法

摘要

本发明涉及一种表达人类反义受磷蛋白基因的重组腺相关病毒及其制备方法，属于生物工程技术领域，用于心力衰竭及其他相关疾病的基因治疗。该重组腺相关病毒由天然状态的腺相关病毒和腺病毒经分子生物学方法人工剪切、修饰和加工而成，该载体系统包括包装质粒pXX₂，辅助质粒pXX₆，真核表达载体pXXUF₁和pXXUF₃，并在真核表达载体pXXUF₁内反向插入了人类受磷蛋白基因编码序列。本发明的表达人类反义受磷蛋白基因的重组腺相关病毒制备方法成功，所制备的重组腺相关病毒滴度高，能驱动目的基因长期有效的表达，可以用于心梗及其他相关性疾病所致心力衰竭的治疗。

主权项

1、一种表达人类反义受磷蛋白基因的重组腺相关病毒，该重组腺相关病毒由天然状态的腺相关病毒和腺病毒经分子生物学方法人工剪切、修饰和加工而成，该载体系统包括包装质粒pXX2，辅助质粒pXX6，真核表达载体pXXUF1和pXXUF3，并在真核表达载体pXXUF1内反向插入了人类受磷蛋白基因编码序列，1)包装质粒pXX2：它含有编码腺相关病毒Rep蛋白和Cap蛋白的编码序列，并在上游和下游各插入一个p5启动子，使表达效率可以提高15倍； 2)辅助质粒pXX6：其删除了腺病毒的致病基因序列，保留了腺病毒E1A、E2A和VA1 RNA基因，它们表达的蛋白质可发挥辅助作用以刺激AAV基因的转录和翻译，保证AAV的产量；3)真核表达载体pXXUF1：所用的是CMV启动子，有较强的表达效率，其含有Not I多克隆位点，可以连接不同的目的基因，pXXUF1反向连接人受磷蛋白基因，该载体含有rAAV转基因表达所必须的末端ITRs重复序列，负责病毒的复制和病毒外壳的包被并携带目的基因。