[发明专利]微生物高效中和抗原的筛选和鉴定方法

摘要

涉及一种筛选和鉴定微生物高效中和抗原蛋白的方法，利用2－D技术使细菌或病毒蛋白质展示在一个平面上，再采用Western blotting确定具有免疫原性的蛋白质，取这些蛋白质分别免疫易感试验动物。然后进行免疫攻毒保护试验，根据保护率确定具有中和作用的免疫原，最后利用质谱技术和生物信息分析确定具有中和作用的蛋白质。其可迅速确定具有中和保护作用的免疫原，达到高效、快速、经济、实用的优选保护性免疫原的目的。一方面可以确定具有中和保护原性的位点，另一方面避免了基因克隆的盲目性，为基因克隆奠定了扎实基础，提高了制备高效疫苗靶点的效率。

主权项

1.微生物高效中和抗原的筛选和鉴定方法，其特征在于所说的微生物高效中和抗原的筛选和鉴定方法的具体步骤如下：1)2-D电泳分离微生物蛋白质：将微生物收集后，超声波破碎，加入裂解液，离心处理2次，然后进行双向电泳(2-D)；2)Western blotting：2-D电泳后，进行免疫转印，分别采用抗目的微生物的特异性抗体和酶标抗体为第一和第二抗体，用DAB或ECL显色，阳性点即为具有免疫原性的蛋白质；3)中和抗原及其中和能力的确定：根据Western blotting的结果，取出具有免疫原性的全部蛋白质，累积收集，每种蛋白点免疫一组易感试验动物，7-10天后，加强免疫1-2次，每次间隔7-10天，然后取50倍半数致死量的微生物进行免疫保护性攻毒试验，根据保护率确定具有中和抗原的蛋白点及其保护效果；4)中和抗原的定性：取出具有中和原性的全部蛋白质，按质谱样品处理方法进行分析样品制备，然后进行质谱和生物信息分析，以确定抗原的蛋白质种类。