[发明专利]呼吸道合胞病毒和腺病毒特异性免疫球蛋白制备方法

摘要

本发明公开了一种有既可预防，又可治疗、标本兼治的抗呼吸道合胞病毒和腺病毒高效价特异性免疫球蛋白的制备方法，首先用呼吸道合胞病毒或腺病毒经Hep－2细胞，Hala细胞或人胚肾细胞培养增殖，制备病毒抗原，或根据呼吸道合胞病毒和腺病毒基因序列用基因工程方法表达制备的保护性抗原。其次经组织培养制备的病毒抗原，以不连续梯度密度离心纯化抗原，或以20％蔗糖淀层浓缩抗原，或层析吸附柱方法纯化抗原。然后用所制备的纯化抗原，建立筛选高效价抗呼吸道合胞病毒和腺病毒免疫球蛋白的方法，及体外中和病毒试验等。最后用低温乙醇方法或离子交换层析法方法或亲和层析法在具有高效价呼吸道合胞病毒和腺病毒免疫球蛋白血源中提取免疫球蛋白。

主权项

1、抗呼吸道合胞病毒和腺病毒高效价特异性免疫球蛋白制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)制备呼吸道合胞病毒腺病毒抗原将呼吸道合胞病毒和腺病毒分别接种于已成长单层的Hep-2细胞或hala细胞或人胚肾细胞，37℃孵育，每天观察细胞病变情况，当致细胞病变(CPE)出现+++以上时或经病毒抗原检测阳性，收集细胞及上清，病毒灭活后经超声打碎、冰冻保存；或按呼吸道合胞病毒和腺病毒的基因序列用基因工程方法表达制备保护性抗原；2)纯化病毒抗原以蔗糖淀层浓缩或以不连续梯度密度离心纯化病毒抗原，或层析吸附柱方法纯化病毒抗原；将超声打碎的呼吸道合胞病毒和腺病毒抗原5000×9离心20分钟，弃去沉渣留上清，装入以15％、30％、45％、60％的蔗糖制备的不连续梯度密度离心管，超速离心，165000×9g，离心2小时，根据病毒的分子量确定该病毒所在离心管位置，吸出冰冻保存；3)建立筛选高效价特异性抗呼吸道合胞病毒和腺病毒免疫球蛋白方法用提取的呼吸道合胞病毒及腺病毒抗原10μg/ml～20μg/ml包被酶板，建立ELISA方法或用病毒感染的细胞建立免疫荧光方法或用病毒抗原建立生物芯片方法，用以筛选正常人群献血源中高效价特异性抗呼吸道合胞病毒和腺病毒免疫球蛋白；并用中和试验等方法确定高效价特异性免疫球蛋白的有效起始浓度； 4)用上述方法筛选的原料用低温乙醇方法或离子交换层析法方法或亲和层析法提取高效价特异性抗呼吸道合胞病毒和腺病毒免疫球蛋白；5)提纯后的抗呼吸道合胞病毒和腺病毒免疫球蛋白经60±1℃，10小时灭活病毒和/或在pH值4.1±0.3，在24±1℃条件下放置21天灭活病毒，再经除菌过滤，分装成抗病毒免疫球蛋白。