[发明专利]一种构建基因组文库的方法无效
| 申请号： | 02160811.3 | 申请日： | 2002-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN1511948A | 公开（公告）日： | 2004-07-14 |
| 发明（设计）人： | 吴乃虎;刘一鸣;黄美娟 | 申请（专利权）人： | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/29;C12N5/04;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 | 代理人： | 胡交宇 |
| 地址： | 100101北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种构建基因组文库的方法，该方法首先制备出原生质体；利用浓度为大于0M小于0.1M的非离子型渗透压调节剂溶液溶涨原生质体，释放出细胞核；将非离子型渗透压调节剂溶液的浓度调整至0.5－0.8M；将细胞核进行洗涤和富集，并从细胞核中提取大分子核DNA；用限制性内切酶对高分子量核DNA进行部分酶切，回收合适大小片段，构建基因组文库。利用该方法提取的基因组DNA质量好，同时又避免了叶绿体和线粒体DNA的污染，又减少了对连接酶有抑制作用的多糖类物质。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 构建 基因组 文库 方法 | ||
【主权项】：
1.一种构建基因组文库的方法，该方法包括以下步骤：(1)用植物外植体诱导愈伤组织； (2)用纤维素酶，果胶酶，离析酶的混合物酶液消化处理得到的植物愈伤组织细胞，制备原生质体；(3)利用浓度为大于0M小于0.1M的非离子型渗透压调节剂溶液溶涨原生质体，释放出细胞核；(4)将步骤(3)中的非离子型渗透压调节剂溶液的浓度调整至0.5-0.8M：(5)将细胞核进行洗涤和富集，并从细胞核中提取大分子核DNA；(6)用限制性内切酶对高分子量核DNA进行部分酶切，回收合适大小片段，构建基因组文库。
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