[发明专利]两真菌与一细菌原生质体融合的特效菌株及其构建方法

摘要

两真菌与一细菌原生质体融合的特效菌株及其构建方法，是将白腐真菌(Phanerochaetechrysosporium)真核细胞、土著细菌YZ1原核细胞(Pseudomonas)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)真核细胞，共三个亲株菌的两界细胞的原生质体进行融合，三亲基因在同一个细胞内重组整合，构建出基因工程特效菌。该技术由双亲跨界融合和三亲跨界融合两部分组成。特效菌株同时含有三亲的基因DNA片段，综合了三亲株优势，利于处理废水。原生质体融合不产生新基因，不存在基因污染问题。

主权项

1、一种由两真菌与一细菌原生质体融合的特效菌株，其特征是以亲株1白腐真菌(Phanerochaetechrysosporium)，亲株2土著细菌YZ1(Pseudomonas)，亲株3酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)真核细胞原生质体和原核细胞原生质体制备后融合。先制备原生质体，并经离心后收集、缓冲液清洗后获得，然后进行二次融合。第一次融合：等量的亲株1白腐真菌或亲株3酿酒酵母细胞的原生质体与亲株2土著细菌YZ1细胞的原生质体混合、并在聚乙二醇、CaCl2、蔗糖配制的诱导液中融合，经离心后收集融合产物；第二次融合：上次得到的等量的Fhh与亲株3酿酒酵母或白腐真菌细胞的原生质体混合、在聚乙二醇、CaCl2、蔗糖配制的诱导液中融合，经离心后收集融合产物、含蔗糖高渗缓冲液离心清洗后、分别涂布于SIM1、SIM2、SIM3三种固体鉴别培养基上，同时能在三种培养基上长出的菌落为三亲跨界融合的产物NJU-Fhhh1或Fhh。