[发明专利]从味精废料中提取核苷酸的方法

摘要

本发明公开了一种从味精废料中提取核苷酸的方法。其步骤是先从味精废料所含的谷氨酸棒杆菌内将核酸分解出来，然后对所分解出来的核酸进行沉淀，再利用磷酸二酯酶对所沉淀的核酸进行定向酶解，最后利用活性炭柱对所酶解的产物进行提纯而得到5′-核苷酸成品。该方法克服了目前谷氨酸棒杆菌自溶法提取核苷酸工艺所存在的提取率低等弊病，充分利用了味精废料中的有用资源，所提取的产品得率高、纯度好、成本低，适于工业化大批量生产。

主权项

1.一种从味精废料中提取核苷酸的方法，包括以下步骤： 1)核酸的提取：取固形物含量占30～40％的味精废料与2～3倍 重量的水混合搅拌均匀，调节其pH值至3～4并保持25～35分钟；然 后将pH值调至7～8，加入上述混合液体积量4～6％的食盐，待食盐溶 解完毕后，升温至90～100℃，保持1～2小时；再将其温度降至40 ℃～50℃，pH值调至4～6，同时加入阴离子絮凝剂，直至混合液中的 菌体絮凝成块后，对其进行分离，分离出的清液即为含有核酸的提取 液，将此核酸提取液冷冻至8～12℃待用； 2)核酸的沉淀：预先准备好步骤1)所制核酸提取液体积量16～ 25％的浓度为3N的盐酸置于沉淀缸中，再加入步骤1)所得核酸提取 液与其混合，使此核酸混合液的pH值处于1～2之间，恰好达到核酸 的等电点，此时核酸即大量沉淀下来；核酸沉淀之后，将上层清液抽 光，所得沉淀加水溶解成1～2％浓度的核酸稀溶液，再调节其pH值至 4.8～5.2，升温至80～90℃待用； 3)磷酸二酯酶酶液的制备：取重量为步骤2)所得核酸稀溶液中 纯核酸量2.8～3.2倍的利用桔青霉菌种发酵生产的麸皮霉，与9～10 倍重量的水在40～50℃的温度下浸泡1～2小时，然后降温至20～30 ℃，滤除固体霉，再升温使清液在70℃保持4～6分钟后迅速降温至 30℃，随后去除孢子，所得清液即为磷酸二酯酶酶液； 4)混合酶解：将步骤2)所得的核酸稀溶液和步骤3)所得的磷 酸二酯酶酶液相混合，在65～75℃、pH值4.8～5.5的条件下水解1～ 2小时，再将其pH值调至7.2～7.8，并升温至90℃，保持12～15分 钟后，迅速降温至30～40℃，去除其中的不溶物，所得清液即为需要 提纯的核苷酸粗液； 5)活性炭柱提纯：将步骤4)所得核苷酸粗液的pH值调节至1.5～ 3.0后上活性炭柱，以每毫升炭柱每分钟0.03～0.05毫升流出液的流 速上柱完毕，然后以同样的流速用软水洗脱去杂，再以同样的流速换 用由40～60％的酒精和0.5～1％的氨水组成的洗脱液进行洗脱，保持炭 柱在50～70℃恒温下洗脱，直至流出液经酒精检测无白色浑浊为止， 所得洗脱液即为浓度3～5％的核苷酸精液；保持此核苷酸精液的温度 为50～70℃，在真空条件下浓缩回收其中的酒精，使其中核苷酸的浓 度提高至9～12％；再调节此高浓度核苷酸液的pH值至2.5～3.5，加 入其体积量3～5倍的95％以上的酒精即得核苷酸沉淀；将此沉淀真空 干燥即得核苷酸成品。