[发明专利]工程化大肠杆菌G830无效
| 申请号： | 00125411.1 | 申请日： | 2000-09-26 |
| 公开（公告）号： | CN1148441C | 公开（公告）日： | 2004-05-05 |
| 发明（设计）人： | 龚毅;杨运桂;杨胜利 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海生物工程研究中心 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/63;C12N15/70;//;C12R1∶19) |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所 | 代理人： | 徐迅 |
| 地址： | 20023*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种适用于高密度发酵的微生物，在所述微生物的染色体上整合有外源的透明颤菌血红蛋白基因，而且该微生物乙酸代谢的主要途径被阻断。新的工程菌G830不仅可消除乙酸的不利积累，而且对氧的利用能力大为提高，因而更适合在高密度发酵条件下表达外源蛋白。本发明还公开了产生在基因组中整合外源基因(如透明颤菌血红蛋白基因)的新方法。 | ||
| 搜索关键词： | 工程 大肠杆菌 g830 | ||
【主权项】：
1.一种产生基因组整合有外源基因的微生物方法，其特征在于，它包括步骤：(a)提供一整合型重组质粒，该质粒含(i)温度敏感型复制子，该复制子在复制温度下复制而在抑制温度下复制受抑制；(ii)所述微生物的染色体基因同源片段A和同源片段B；(iii)待整合的外源基因；以及(iv)2种或多种抗性筛选标记基因；(b)用所述的整合型质粒转化宿主细胞，在抑制温度下筛选出能生长的共整合体；(c)在复制温度下培养步骤(b)中筛选出的共整合体，使共整合体解离；(d)筛选出在复制温度下生长且在抑制温度下生长被抑制的拆分体；(e)在抑制温度下连续培养拆分体，使重组质粒丢失，从而产生基因组整合有外源基因的微生物。
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