[发明专利]重组淋巴毒素衍生物的生产工艺

摘要

本发明利用CN1175638所述淋巴毒素衍生物工程菌，完善了重组菌的发酵、包涵体蛋白的制备、包涵体蛋白的变性复性以及淋巴毒素衍生物的分离纯化，达到稳定表达和高收率、高纯度。提供了能大规模生产的重组淋巴毒素衍生物的生产工艺。

主权项

1.重组淋巴毒素衍生物的生产工艺，所述工艺以N端缺失27个氨基酸的 rhLTαDacDNA克隆入大肠杆菌表达载体pRSETC，所得重组子导入大肠杆菌BL21 (DE3)得到工程菌，其特征在于： (1)将所述工程菌在发酵罐中采用改良M9培养基发酵，温度30-37℃， pH6.7-7.2，通气量5-15L/分钟，罐压0.01-0.02MPa，控制溶解氧浓度为 20-40％， 其中，所述的改良M9培养基含有以下成分： 蛋白胨1.6-2.4g/L 葡萄糖4-6g/L Na₂HPO₄6g/L KH₂PO₄3g/L NaCl0.4-0.6g/L NH₄Cl0.8-1.2g/L MgSO₄0.5g/L， 而且在当溶解氧浓度和pH同时上升，生长进入相对停滞期时，补加补料 培养基，其中所述的补料培养基含有以下成分：蛋白胨90-120g/L；酵母粉 40-60g/L和MgSO₄10g/L， 并且当OD₆₀₀值为50-70时，补加IPTG； (2)收集菌体、破碎和收集包涵体后，洗涤包涵体； (3)用尿素、盐酸胍或氨水将包涵体增溶； (4)用硼砂复性液或Tris复性液进行复性； (5)相继用Q-SepharoseFF离子交换柱层析、Phenyl-SepharoseFF疏 水层析和CM-SepharoseFF离子交换柱层析进行纯化。