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[发明专利]一种抗鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白FlgE的驼源纳米抗体及其制备方法和应用-CN202310673093.3在审
发明人： 郝秀静;李敏;孙山 -专利权人：宁夏大学
申请日： 2023-06-08 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C07K16/12 文献下载
摘要：本发明公开一种抗鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白FlgE的驼源纳米抗体及其制备方法和应用，该纳米抗体能够靶向鼠伤寒沙门氏菌鞭毛FlgE蛋白，其含有抗原互补决定区CDR1、CDR2和CDR3的重链可变区，其中，该抗体含有选自SEQ ID NO.1‑3任一项所示的氨基酸序列的重链可变区。本发明提供的抗FlgE鞭毛蛋白的驼源纳米抗体具有针对FlgE蛋白较高的亲和力，能够与鼠伤寒沙门氏菌有效结合并触发细菌凝集反应，这为胃肠道感染替代抗生素疗法的开发提供思路和手段，同样为口服化活性抗体制剂的开发提供重要的理论依据。
一种伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白 flge 纳米抗体及其制备方法应用

[发明专利]以LppA基因为检测靶标进行牛支原体检测的组合物、试剂盒和方法-CN201910847999.6有效
发明人：李敏;郝秀静;韩杨;马春骥;王玉炯 -专利权人：宁夏大学
申请日： 2019-09-09 - 公布日： 2023-07-25 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开以LppA基因为检测靶标进行牛支原体检测的组合物、试剂盒和方法。本发明的组合物的检测靶标为牛支原体的LppA基因，可以针对该基因中的多种不同片段，并且通过实验验证了本发明的组合物可设计出多种不同具体组合情形以应用于传统PCR、basic RPA、nfo RPA和exo‑RPA等多种扩增方法，另外可借助琼脂糖凝胶电泳、测流层析试纸条以及恒温荧光扩增仪来观察实验结果。本发明的组合组能够做到牛支原体标准株及野生株种内的保守性以及牛支原体与其他致病菌种间的特异性。基于本发明的组合物可建立特异性好、敏感性高且可以稳定重复的牛支原体快速检测方法，具有操作简单，便捷省时，无需大型的实验仪器设备。
lppa 基因检测靶标进行支原体组合试剂盒方法

[发明专利]用于检测牛支原体的组合物、试剂盒和方法-CN201910560295.0有效
发明人： 郝秀静;李敏;韩杨;马春骥 -专利权人：宁夏大学
申请日： 2019-06-26 - 公布日： 2023-07-25 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开用于检测牛支原体的组合物、试剂盒和方法。本发明通过设计牛支原体的LppA基因的特异性引物、探针完成了牛支原体的精确检测，该引物探针组合能够做到牛支原体标准株及野生株种内的保守性以及牛支原体与其他致病菌种间的特异性。本发明对检测过程中最佳反应时间与最佳反应温度、检测的特异性、敏感性、重复性和稳定性均进行了探索，找到了最佳反应条件，建立了特异性好、敏感性高且可以稳定重复的牛支原体快速检测方法，具有操作简单，便捷省时，无需大型的实验仪器设备，非常适合没有任何实验基础的人员操作。
用于检测支原体组合试剂盒方法

[发明专利]用于检测绵羊肺炎支原体的组合物、试剂盒和方法-CN201910614546.9有效
发明人：李敏;郝秀静;金华;马春骥;王玉炯 -专利权人：宁夏大学
申请日： 2019-07-09 - 公布日： 2023-07-25 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开用于快速检测绵羊肺炎支原体的组合物、试剂盒和方法。本发明通过设计绵羊肺炎支原体的转酮醇酶基因的特异性引物、探针，完成了绵羊肺炎支原体的精确检测。本发明对检测过程中最佳反应时间与最佳反应温度、检测的特异性、敏感性、重复性和稳定性均进行了探索，找到了最佳反应条件，建立了特异性好、敏感性高且可以稳定重复的绵羊肺炎支原体快速检测方法，具有操作简单，便捷省时，无需大型的实验仪器设备，非常适合没有任何实验基础的人员操作，实现现场检测。
用于检测绵羊肺炎支原体组合试剂盒方法

[发明专利]驼源纳米抗体基因库的构建方法-CN201811322699.8有效
发明人：李敏;郝秀静;马春骥;罗海霞;金华;韩杨 -专利权人：宁夏大学
申请日： 2018-11-08 - 公布日： 2021-04-23 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开驼源纳米抗体基因库的构建方法，其包括以下步骤：(1)免疫步骤：利用第一抗原体系首次免疫骆驼，然后利用第二抗原体系加强免疫骆驼，得到免疫后的骆驼，采取其血液；(2)扩增步骤：提取血液中淋巴细胞的总RNA，逆转录为cDNA，以其作为模板扩增重链抗体可变区的基因片段，其中基因片段至少包括来自IgG2和IgG3的片段；(3)转化步骤：将基因片段克隆至宿主细胞，得到驼源纳米抗体基因库。本发明的构建方法能够获得更大库容的基因库。
纳米抗体基因库构建方法

[发明专利]以转酮醇酶基因为靶标检测绵羊肺炎支原体的组合物、试剂盒和方法-CN201910871216.8在审
发明人：李敏;郝秀静;金华;马春骥;王玉炯 -专利权人：宁夏大学
申请日： 2019-09-16 - 公布日： 2019-12-13 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开以转酮醇酶基因为靶标检测绵羊肺炎支原体的组合物、试剂盒和方法。本发明的组合物的检测靶标为绵羊肺炎支原体的转酮醇酶基因，可以针对该基因中的多种不同片段，并且通过实验验证了本发明的组合物可设计出多种不同具体组合情形以应用于传统PCR、basic RPA、nfo RPA和exo RPA等多种扩增方法，另外可借助琼脂糖凝胶电泳、侧流层析试纸条以及恒温荧光扩增仪来观察实验结果。本发明对检测过程中最佳反应时间与最佳反应温度、检测的特异性、敏感性、重复性和稳定性均进行了探索，找到了最佳反应条件，建立了特异性好、敏感性高且可以稳定重复的绵羊肺炎支原体快速检测方法，具有操作简单，便捷省时，无需大型的实验仪器设备。
绵羊肺炎支原体转酮醇酶检测琼脂糖凝胶电泳实验仪器设备最佳反应条件层析试纸条靶标检测快速检测实验验证组合情形传统PCR 基因大型的扩增仪试剂盒荧光靶标侧流扩增省时重复观察应用探索

[发明专利]一种结核分枝杆菌ERP 12基序突变为PGLTS的重组质粒PEGFP-12-CN201510309809.7在审
发明人：王玉炯;李敏;郝秀静;何玉龙;马臣杰 -专利权人：宁夏大学
申请日： 2015-06-03 - 公布日： 2015-08-26 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种结核分枝杆菌ERP 12基序突变为PGLTS的重组质粒PEGFP-12，根据结核分枝杆菌野生型ERP的序列，合成出12基序完全突变为PGLTS的ERP完整序列，并进行人源化优化，构建到PEGFP-N1真核生物表达载体上，并命名为PEGFP-12。突变后的序列如SEQ：ID：NO：1所示。本发明构建了结核分枝杆菌ERP的12基序突变为PGLTS的基因重组质粒，将质粒用脂质体转染法转到A549细胞中，然后做蛋白芯片检测，并与野生型ERP序列相比较，发现基序完全突变为12个PGLTS之后引起细胞炎性相关因子表达明显上调，说明突变后能够引起更明显的炎性反应，为研究PGLTS基序突变与功能关系提供有力数据。
一种结核分枝杆菌 erp 12 突变 pglts 重组质粒 pegfp