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[发明专利]基于流式细胞术检测活的不可培养状态细菌抗生素耐药性的方法及其应用-CN202310415237.5在审
发明人：李桂英;刘建莹;蔡仪威;安太成 -专利权人：广东工业大学
申请日： 2023-04-18 - 公布日： 2023-07-04 - 主分类号： G01N15/14 文献下载
摘要：本发明属于环境微生物技术领域，公开了基于流式细胞术检测活的不可培养状态细菌抗生素耐药性的方法及其应用。该方法通过消毒技术获得纯的活的不可状态细菌，调整细菌浓度，并和不同浓度的抗生素等体积混匀孵育。完成孵育后，离心、洗涤、重悬，按照比例加入SYTO 9和PI染色剂在适宜温度中避光孵育，调整流式细胞仪的FSC、SSC、FITC和PI的电压参数，分析活的不可培养状态细菌的存活率来确定其抗生素耐药性。该方法具有可操作性强、快速、高通量、准确度高、灵敏度高且应用范围广的优势，可检测不同种类活的不可培养状态细菌对不同种类抗生素的耐药性，可应用在环境微生物技术领域中。
基于细胞检测不可培养状态细菌抗生素耐药性方法及其应用

[发明专利]一种活的不可培养状态细菌的复苏方法及其应用-CN202310415234.1在审
发明人：安太成;刘建莹;蔡仪威;陈敏;李桂英 -专利权人：广东工业大学
申请日： 2023-04-18 - 公布日： 2023-06-02 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明属于环境微生物技术领域，公开了一种活的不可培养状态细菌的复苏方法及其应用。该方法通过消毒技术诱导获得具有活力的活的不可培养状态细菌，首先调整活的不可培养状态细菌悬浮液的pH，调整暗修复的温度和转速，完成暗修复后调整温度进行光修复培养，最后将菌液涂布到琼脂平板获得复苏的细菌。该方法可通过精准调整活的不可培养状态细菌的活力、悬浮液pH、暗修复培养温度和转速、光修复培养温度和时间等不同参数以稳定地复苏不同消毒技术诱导形成活的不可培养状态的不同种类的细菌，该方法时间可控、成本低廉、原材料易得、适用范围宽、可针对不同类型细菌、操作性强、相对环保，可应用在环境微生物技术领域中。
一种不可培养状态细菌复苏方法及其应用

[发明专利]一种检测耐药基因的引物组合物及其应用-CN202310084952.5在审
发明人：安太成;陈春亮;蔡仪威;李桂英;赵惠军 -专利权人：广东工业大学
申请日： 2023-01-17 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测耐药基因的引物组合物及其应用，包含引物A和引物B，其中引物A选自引物对1～2，引物B选自引物对3～5；所述引物对1为核苷酸序列如SEQ IDNO.1～2所示的引物；所述引物对2为核苷酸序列如SEQ ID NO.3～4所示的引物；所述引物对3为核苷酸序列如SEQ ID NO.5～6所示的引物；所述引物对4为核苷酸序列如SEQ ID NO.7～8所示的引物；所述引物对5为核苷酸序列如SEQ ID NO.9～10所示的引物。本发明提供的引物特异性强，灵敏度高，用于检测的操作流程简单，成本低廉，同时能够大批量、快速且精确地从核酸含量低的环境样本中检测出多重耐药基因，大大节约了检测的时间和成本，可推广用于抗生素污染的监测。
一种检测耐药基因引物组合及其应用

[发明专利]一种细胞内活的不可培养细菌的检测方法及其应用-CN202211336508.X在审
发明人：安太成;刘琴;李桂英;蔡仪威 -专利权人：广东工业大学
申请日： 2022-10-28 - 公布日： 2023-03-07 - 主分类号： G01N15/14 文献下载
摘要：本发明属于细胞内微生物检测领域，公开了一种细胞内活的不可培养细菌的检测方法及其应用。该方法是从宿主细胞分离出的细菌进行样品洗涤，后用荧光染料SYTO9和PI分别与细菌悬液共孵育标记细菌，随后通过流式细胞仪检测待测细菌悬液样本中的活的不可培养细菌和死细菌的含量。本发明使用灵敏的检测仪器流式细胞仪标记不同状态的细菌、确定最佳实验条件以及调整仪器参数，可以提高对细胞内活的不可培养细菌鉴别的准确度，该方法不仅具有广谱识别性和操作简便性，还能快速、准确检测出活的不可培养细菌，对于临床样品中的活的不可培养细菌的检测具有重要意义。
一种细胞内不可培养细菌检测方法及其应用

[发明专利]一种基于光催化诱导获得活的不可培养状态细菌的方法及其应用-CN202211398282.6在审
发明人：安太成;蔡仪威;李桂英 -专利权人：广东工业大学
申请日： 2022-11-09 - 公布日： 2023-01-31 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明属于环境微生物技术领域，公开了一种基于光催化诱导获得活的不可培养状态细菌的方法及其应用。该方法通过将冷冻条件的细菌菌种复苏培养至使细菌生长至对数生长期，得到菌悬液；然后将菌悬液离心后去除上清液得到菌体，用生理盐水洗涤并重悬菌体，最后调整细菌的光密度，用生理盐水经梯度稀释后得到细菌初始原液，向细菌初始原液中垂直插入光催化剂片状TiO2纳米管阵列，使用LED紫外灯进行光催化反应，获得活的不可培养状态细菌。该方法通过调整细菌初始原液的浓度，片状TiO2纳米管阵列等诱导理化参数，LED紫外灯的波长和光强，光催化诱导时长等不同参数，高效稳定诱导活的不可培养状态细菌，可应用在环境微生物领域中。
一种基于光催化诱导获得不可培养状态细菌方法及其应用

[发明专利]一种光催化诱导获得细菌小菌落变异体的方法及其应用-CN202211399613.8在审
发明人：安太成;蔡仪威;李桂英 -专利权人：广东工业大学
申请日： 2022-11-09 - 公布日： 2023-01-17 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明属于环境微生物技术领域，公开了一种光催化诱导获得细菌小菌落变异体的方法及其应用。该方法将细菌菌种接种到营养肉汤中复苏培养，使细菌生长至对数生长期；离心后去除上清液得到菌体，用生理盐水洗涤并重悬菌体，调整细菌的光密度，用生理盐水进行梯度稀释，得到初始菌悬液，将初始菌悬液调节pH至5.5～9.2，溶解氧浓度为1～9mg/L，再插入片状TiO2纳米管，使用LED紫外灯进行光催化诱导，得到细菌小菌落变异体。该方法通过调整初始菌悬液浓度、片状TiO2纳米管、紫外灯光强以及诱导时间等不同理化参数，适用不同种类和浓度下的细菌小菌落变异体体的诱导，实现小菌落变异体的稳定诱导，可应用在环境微生物领域。
一种光催化诱导获得细菌菌落异体方法及其应用

[发明专利]一种在宿主细胞存在条件下诱导形成活的不可培养状态细菌的方法及其应用-CN202211335264.3在审
发明人：李桂英;刘琴;蔡仪威;安太成 -专利权人：广东工业大学
申请日： 2022-10-28 - 公布日： 2023-01-06 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明属于微生物技术领域，公开了一种在宿主细胞存在条件下诱导形成活的不可培养状态细菌的方法及其应用，该方法是将处于3～20代的细胞转移孔板中，得到诱导细胞；将处于对数增长期的细菌经缓冲液洗涤，改性细胞培养液重悬，得到细菌悬液。将细菌悬液加入诱导细胞中，在恒温培养箱中孵育1～5h后，后加入含10～500mg/L庆大霉素改性细胞培养液，经细胞处理3～10d后，加入细胞裂解液收集胞内的细菌再洗涤、离心、重悬，得到活的不可培养状态的细菌。本发明在宿主细胞存在条件下可以诱导细菌进入活的不可培养状态，不仅拓展了对活的不可培养状态细菌的认识，也为临床中的复发性、慢性感染疾病提供理论与技术支持。
一种宿主细胞存在条件下诱导形成不可培养状态细菌方法及其应用

[发明专利]一种利用耐药靶点的抑制剂调控耐药基因接合转移的方法及应用-CN202211026870.7在审
发明人：安太成;王再霞;王保强;李桂英;蔡仪威;廖文 -专利权人：广东工业大学
申请日： 2022-08-25 - 公布日： 2022-11-11 - 主分类号： C12Q1/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种利用耐药靶点的抑制剂调控耐药基因接合转移的方法及应用。所述方法：将供体菌与受体菌分别活化后制备菌悬液，然后与耐药靶点的抑制剂混合，培养得到接合转移菌液；然后将接合转移菌液涂布于双抗性平板上，通过接合子浓度和受体菌浓度计算接合转移频率；所述供体菌含有耐抗生素的耐药基因，所述受体菌不含该耐抗生素的耐药基因，含有另一种耐抗生素的耐药基因；本发明通过耐药靶点的抑制剂抑制耐药基因的接合转移，并通过特定范围的供体菌浓度，供受体菌混合比例，耐药靶点的抑制剂的浓度、种类、作用时间等因素实现不同情况下耐药基因的接合转移频率的调控；可以调控耐药基因的传播，控制耐药性的发展。
一种利用耐药抑制剂调控基因接合转移方法应用

[发明专利]一种运用亚致死光催化调控耐药基因接合转移频率的方法及其应用-CN202210085908.1在审
发明人：李桂英;吉昊;安太成;蔡仪威 -专利权人：广东工业大学
申请日： 2022-01-25 - 公布日： 2022-04-15 - 主分类号： C12Q1/10 文献下载
摘要：本发明属于环境微生物和水消毒领域，公开了一种运用亚致死光催化调控耐药基因接合转移频率的方法及其应用。该方法将调控的供体菌溶液和受体菌液混合，在20～40℃的恒温摇床中震荡培养，再将所得接合转移菌液稀释涂布在双抗板上，并将受体菌耐链霉素的大肠杆菌液稀释涂布在含有链霉素的平板上，调整接合转移菌液中接合子的浓度以及受体菌液中受体菌的浓度，通过接合子浓度和受体菌浓度计算接合频率，实现调控耐药基因接合转移频率。该方法通过调整亚致死光催化条件下光强，温度，浓度等不同理化参数，适用不同种类和浓度下的耐药菌中耐药基因的结合转移研究，实现对耐药基因的接合转移频率进行调控，达到有效控制耐药细菌传播的目的。
一种运用致死光催化调控耐药基因接合转移频率方法及其应用

[发明专利]一种光催化氧化对环境水体中抗生素耐药菌靶点灭活的方法及其应用-CN202111407553.5在审
发明人：王保强;刘永杰;安太成;李桂英;蔡仪威;王万军 -专利权人：广东工业大学
申请日： 2021-11-24 - 公布日： 2022-03-11 - 主分类号： C02F1/72 文献下载
摘要：本发明属于氧化法消除环境水体中病原微生物技术领域，公开了一种光催化氧化对环境水体中抗生素耐药菌靶点灭活的方法及其应用。该方法将碳酸氢钠溶液或磷酸溶液添加到含有抗生素耐药菌的模拟环境水体中调节pH至5.5～9.2，并控制溶解氧浓度为1～9mg/L，放置在恒温箱中控制温度为0～60℃，添加二氧化钛催化剂后，开启氙灯进行光催化氧化反应，在探索的最优灭活条件下，实现对环境水体中抗生素耐药菌靶点的有效杀灭；抗生素作用靶点为细胞壁、细胞膜、蛋白质合成、RNA合成、叶酸合成或DNA合成。本发明实现了对环境水体中耐药菌靶点的有效灭活，不同抗生素作用靶点耐药菌在水体中扩散与传播提供了一种高效阻控的方法手段。
一种光催化氧化环境水体抗生素耐药菌靶点灭活方法及其应用

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