本发明涉及一种产生物表面活性剂的混合菌及其筛选方法,该混合菌由三种菌株混合组成,分别为名称为施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)且保藏编号为CCTCC AB 205091、名称为类诺卡氏菌属(Nocardioides ginsengagri)且保藏编号为CCTCC S2013441和名称为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)且保藏编号为CCTCC AB 205141的菌株组成,该混合菌是通过待筛选采油菌株的挑选、将挑选好的待筛选采油菌株进行活化及培养、将活化及培养好的待筛选采油菌株利用血平板法进行初步筛选得到初筛发酵液、及初筛发酵液采用排油圈法进行复筛后筛选所得。该混合菌综合了三种菌株的优点,能够产生应用于油田采油的生物表面活性剂,且该混合菌的筛选方法适用面广泛,有效降低了筛选成本,此外该筛选方法准确性高、选择性强、流程方便易操作,且与现有技术相比周期更短。