本申请公开了一种毒素基因及其在重组和/或基因编辑的工程菌构建中的应用。毒素基因选自SEQ ID NO.1～5任一所示。将该组可相互通用的毒素作为负筛标记，可以应用在质粒的有效克隆和快速获得无编辑质粒的基因工程菌株中，即能够应用在重组表达质粒的阳性克隆筛选和质粒丢失菌株筛选过程中，能够降低质粒构建过程中的假阳性，可快速获得正确的阳性克隆，节省重组表达及基因编辑质粒构建的时间和成本。
本申请涉及质粒技术领域，尤其涉及一种穿梭质粒、构建方法及应用。该穿梭质粒以pEZ15Asp为基础质粒，对其进行改造，通过对其复制子进行替换后，该穿梭质粒具有如SEQID NO.26～29任一所示的核苷酸序列所示。该穿梭质粒可以在运动发酵单胞菌和大肠杆菌中穿梭，第一复制起始区具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，第二复制起始区具有SEQ IDNO.3～8任一所示的核苷酸序列。其电转入得到的运动发酵单胞菌转化子，在稳定传代30代后生长速率无显著下降，并可与内源性质粒长期兼容，说明穿梭质粒的传代稳定性强，十分适合于构建重组菌株，进行运动发酵单胞菌代谢工程及基因功能的研究和应用。
