本发明一方面提供了制备脂质酰基转移酶变体的方法，所述方法包括在宿主生物中表达与编码亲本脂质酰基转移酶的核苷酸序列具有至少90%同一性并且包含至少一个修饰(合适地为至少两个修饰)的核苷酸序列，所述修饰的位置对应于在所编码的氨基酸序列中位于以下的氨基酸：a)所述酶的峡谷区(即优选氨基酸残基31、27、85、86、119和120)；和/或b)插入位点1(即氨基酸残基22-36)和/或c)插入位点2(即氨基酸残基74-88)，其中所述峡谷区、插入位点1和/或插入位点2被定义为在基于初级或三级结构比对时，对应于本发明SEQ ID No.16或6所示的酶的峡谷区、插入位点1或插入位点2(或以上教导的相应氨基酸残基)的区域。优选的修饰为以下一个或多个：L3IQ,H,N,T,F,Y或C(优选L31Q)；M27R,G，H,K,Y，D,N,V，C,Q,L,E,S或F(优选M27V)；V85H,R5D或E；I86R,Y，S,V，I,As,T,M,F,C或L(优选I86S或A)；A119T或I；Y120K或E；W122S,L或A(优选W122L)；E201R；Q245S；F235A或V；W232G或S；和/或A236G或E。
本发明涉及制备变体脂肪分解酶的方法，其包括在宿主生物中表达核苷酸序列，所述核苷酸序列与编码真菌脂肪分解酶的核苷酸序列具有至少90％的同一性并且在对应于所编码氨基酸序列中的位置包含至少一个以下修饰：a)与原真菌脂肪分解酶相比在所述氨基酸序列中引入至少一个糖基化位点(或一个额外的糖基化位点)；b)在所述多肽的表面位置和所述酶活性位点(催化三联体)的远侧外环内的位置引入至少一个氨基酸，所述氨基酸更加亲水(与原氨基酸相比)；或c)在33、63、78、190、305、306或320位中的一个或多个位置的取代或插入，或者在311-312或307-319位中的一个或多个位置的删除，其中各氨基酸位置均对应于与SEQ ID No.2比对时所述氨基酸序列的位置；其中当所述核苷酸序列与编码SEQ ID No.22或SEQ ID No.23所示的真菌脂肪分解酶序列的核苷酸序列具有至少90％的同一性时，所述修饰不是在63位的取代并且所述删除不在311-312位。优选地，所述核苷酸序列与SEQ ID No.1具有至少90％同一性。本发明还涉及通过所述方法产生的多肽以及新核酸。
