本发明公开了一种pCasRA质粒，所述pCasRA质粒的核苷酸信息如SEQ ID NO：1所示。所述pCasRA质粒以pCas9质粒作为载体骨架，在载体骨架上接入接合转移位点oriT、pRA0726质粒的复制子和头孢西丁抗性基因，并将pCas9质粒中的crRNA部分替换成Cas9蛋白基因(SEQ ID NO：20)和整合型sgRNA(SEQ ID NO：7)的连接产物。本发明所述pCasRA质粒能够在大肠杆菌中通过接合转移到鸭疫里氏杆菌中，并且该pCasRA质粒能够在鸭疫里氏杆菌中稳定表达Cas9蛋白基因，进行基因组DNA编辑，实现基因敲除和/或单碱基突变。
本发明公开了一种基于RPA‑CRISPR‑Cas12a可视化检测鸭疫里氏杆菌的试剂盒及其应用，所述试剂盒包含特异性crRNA、鸭疫里氏杆菌特异性RPA引物对和探针，所述特异性crRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述特异性RPA引物对的上游引物RPA‑F、下游引物RPA‑R和探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO：3～5所示；探针5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团。所述试剂盒具有成本低，操作便捷、耗时少、灵敏度高和特异性强等特点，全程在37～40℃环境下进行，可以有效脱离实验室大型仪器的依赖。
