本申请涉及生物技术领域,尤其涉及一种用于推断水中尸体溺死地的引物组及制备方法和应用;所述引物组包括:如SEQ ID NO:1~12所示的6组引物对;通过针对硅藻的叶绿体中基因组进行设计,且引物组中各引物对之间相互不冲突,使得后续检测阶段,只需经过一次高通量测序和分析,就能得到多个检测结果,再针对检测结果的关联分析,进而准确推断水中尸体的溺死地;由于引物组是针对多个硅藻叶绿体的标记位点进行设计的,避免了单个标记位点的漏检与单纯形态学的误判,同时降低了单个标记检测与形态学观察的繁琐工作量,因此不仅可以提高检测过程中的效率和特异性,还能提高检测的准确度。