本发明适用于物医学领域,提供了一种稳定表达H1N1流感病毒RNPs的Hela细胞株的构建方法,包括以下步骤:构建重组质粒pcDNA3.1/Zeo-PB1、pcDNA3.1/Hygro-PB2、pcDNA3.1/Neo-PA、pEF6/V5-HisA-NP;获取四种抗生素Zeocin、Hygromycin B、Geneticin、Blasticidin S HCl感染Hela细胞的最佳筛选浓度;将所述重组质粒pcDNA3.1/Zeo-PB1、pcDNA3.1/Hygro-PB2、pcDNA3.1/Neo-PA、pEF6/V5-HisA-NP分次转染Hela细胞,筛选获得Hela-RNP细胞株。
本发明提供了一种同时检测呼吸道合胞病毒、腺病毒和人博卡病毒试剂盒和同时检测呼吸道合胞病毒、腺病毒和人博卡病毒的方法。该同时检测呼吸道合胞病毒、腺病毒和人博卡病毒试剂盒包括有分别特异性扩增呼吸道合胞病毒基因、腺病毒基因、人博卡病毒基因的如SEQ ID NO:1、2、4、5、7、8引物基因序列,用于检测呼吸道合胞病毒基因、腺病毒基因、人博卡病毒基因的如SEQ ID NO:1、6、9的分子信标探针。本发明同时检测呼吸道合胞病毒、腺病毒和人博卡病毒试剂盒采用能同时检测呼吸道合胞病毒、腺病毒和人博卡病毒,且检测周期短,效率高。另外,还能保证两两荧光信号之间无相互干扰,其灵敏度高。
本发明涉及流感病毒检测领域,尤其涉及一种流感病毒N1、N2亚型双重实时荧光RT-PCR检测试剂盒,所述试剂盒包括:特异性扩增流感病毒N1基因序列的引物,其碱基序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示;用于检测流感病毒N1基因的Taqman探针,其碱基序列如SEQ ID NO:3所示;特异性扩增流感病毒N2基因序列的引物,其碱基序列如SEQ ID NO:4和SEQ IDNO:5所示;用于检测流感病毒N2基因的Taqman探针,其碱基序列如SEQ IDNO:6所示;上述所有Taqman探针序列可由其碱基互补序列替换。采用本发明所述试剂盒对流感病毒N1、N2亚型进行检测,具有快速简单、低成本、结果稳定等优点。