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[发明专利]一种研究SNX17与LRP4表达互做的实验模型制备系统-CN202211169677.9有效
发明人：高峰;吕杰;张婧;赵雪;张迎娜;贺笑笑;方华 -专利权人：郑州大学
申请日： 2022-09-26 - 公布日： 2023-07-18 - 主分类号： A01K1/03 文献下载
摘要：本发明公开了一种研究SNX17与LRP4表达互做的实验模型制备系统，包括供给总控模块、供给输送模块、培养模块、背部注射模块、足部注射模块、负压定位模块、过表达实验反应模块，所述供给总控模块设置在所述供给输送模块下方，若干个所述培养模块为一组，环形分布在所述供给输送模块四周，所述培养模块靠近所述供给输送模块一侧设置有用于驱赶实验鼠的驱赶单元；利用供给总控模块与供给输送模块形成控制输送通路，此时培养模块环形分布在供给输送模块的四周，将水路、电路、气路、物料通路继承在供给输送模块的内部往四周培养模块输送，实验鼠进行自动化饲料、监控、注射，简化结构，保证模型的培养质量，缩小模型之间由于自身问题导致的结论误差，提高结论精确度。
一种研究 snx17 lrp4 表达实验模型制备系统

[发明专利]一种抗NT5C1A自身抗体检测方法及体外诊断试剂盒-CN202310000740.4在审
发明人：吕杰;高峰;赵雪;张婧;张迎娜;张琳媛;陈姝帆;孙展;方华 -专利权人：郑州大学
申请日： 2023-01-03 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗NT5C1A自身抗体检测方法及体外诊断试剂盒，所述的检测方法包括提取人肌肉组织总RNA及获得总cDNA、构建重组表达pSJMY‑NT5C1A‑GFPC载体、制备含重组表达载体pSJMY‑NT5C1A‑GFPC的细胞、构建并验证CBA间接免疫荧光法和筛选应用于临床血清标本NT5C1A抗体等步骤。本发明提出一种适用于临床的抗NT5C1A自身抗体检测方法，通过构建带有荧光标签的NT5C1A真核表达载体，并利用脂质体转染的方式建立基于HEK293细胞的双色间接免疫荧光方法，制备抗NT5C1A抗体细胞，测定患者血清中抗NT5C1A抗体，可以最大限度的维持蛋白的空间构象，提高检测的特异性，对患者的早期诊断和疗效评价均有明确的指导意义，且该方法中所使用的试剂均为常规试剂，便于获得，有利于降低临床检测成本，具有显著的社会效益。
一种 nt5c1a 自身抗体检测方法体外诊断试剂盒

[发明专利]一种用于人血清脑脊液GFAP抗体的双色免疫荧光检测方法-CN202211690502.2在审
发明人：赵雪;高峰;张婧;吕杰;张迎娜;方华 -专利权人：郑州大学
申请日： 2022-12-19 - 公布日： 2023-04-21 - 主分类号： G01N33/53 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于人血清脑脊液GFAP抗体的双色免疫荧光检测方法，包括获取待检患者的检验样本和特征信息、检测样本阳性初筛、构建GFAPα和GFAPε过表达的HEK‑293T细胞模型、利用过表达GFAPα和GFAPε的HEK‑293T细胞模型确证GFAP抗体、构建患者特征信息与阳性率关联的数学模型和评价模型预测性能，根据分类结果计算阳性率步骤。本发明通过构建患者特征信息数据库，构建以阳性率为结局变量，特征信息为解释变量的随机森林模型，可以根据模型的分类结果，通过待检患者的基本信息和临床症状信息预测患者GFAP抗体阳性的概率，并提出新的检测方法以提高GFAP抗体检出的准确性，探究GFAP星形细胞病的诊治方案，对于制定合理的诊治方案具有一定的指导意义。
一种用于血清脑脊液 gfap 抗体免疫荧光检测方法

[发明专利]一种基于细胞免疫荧光法的人CNTN1-Ab检测方法及试剂盒-CN202211480034.6在审
发明人：张婧;高峰;赵雪;张迎娜;吕杰;方华 -专利权人：郑州大学
申请日： 2022-11-22 - 公布日： 2023-03-17 - 主分类号： G01N33/564 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于细胞免疫荧光法的人CNTN1‑Ab检测方法及试剂盒，所述的检测方法基于双色间接细胞免疫荧光法，通过转染细胞表达自带GFP荧光信号的抗原蛋白，并使用红色荧光二抗显示捕获的标本中的阳性抗体，在荧光显微镜的蓝色激发光和绿色激发光激发下，依据Merge后细胞表面的颜色判定抗体性质，包括重组质粒pSJMY‑CNTN1‑GFPc的构建、鉴定与扩增、验证pSJMY‑CNTN1‑GFPc质粒表达情况、转染细胞的固定与破膜和人CNTN1‑Ab的测定等步骤，所述试剂盒依据所述的抗体检测方法制得。本发明提出的检测方法显著提高抗体检测的特异性，基本保持了目的抗原蛋白的空间构象，最大程度还原了抗原抗体结合的自然状态、自身抗体可视化，观察直观，且可同时在细胞中定位抗原和抗体。
一种基于细胞免疫荧光 cntn1 ab 检测方法试剂盒

[发明专利]一种具有排除非特异性荧光干扰的GAD65抗体检测系统-CN202211371942.1在审
发明人： 张迎娜;高峰;吕杰;赵雪;张婧;方华 -专利权人：郑州大学
申请日： 2022-11-03 - 公布日： 2023-02-24 - 主分类号： G01N33/564 文献下载
摘要：本发明公开了一种具有排除非特异性荧光干扰的GAD65抗体检测系统，包括重组质粒构建单元、细胞转染单元、免疫荧光测定单元和流式细胞术检测单元，本发明利用分子克隆技术，通过构建pCMV‑AC‑GFP‑GAD65真核表达载体转染HEK293细胞，表达蛋白为GAD65的全长蛋白，具有抗体识别的空间构象表位，保持了目标抗原蛋白的三维空间构象，最大程度还原了抗原抗体结合的天然状态，由于载体本身带有绿色荧光蛋白(GFP)标签，可在转染细胞后直接观察到细胞转染效率，在检测抗体的时候通过对比双色荧光的位置及数量来排除非特异性荧光，提高特异性，并结合免疫荧光测定法和流式细胞术，可以对抗体进行定性和定量检测，对患者治疗疗效的评估具有重要指导价值。
一种具有排除非特异性荧光干扰 gad65 抗体检测系统

[发明专利]针对AChR单亚基抗体的检测试剂盒及其应用-CN202110854649.X有效
发明人：高峰;周淑贤;贺笑笑;纪莹;张迎娜;吕杰 -专利权人：郑州大学
申请日： 2021-07-28 - 公布日： 2023-02-17 - 主分类号： G01N33/564 文献下载
摘要：本发明公开了针对AChR单亚基抗体的检测试剂盒，该试剂盒包括细胞检测组件━含荧光标记的AChR单亚基抗原的转染细胞。上述试剂盒通过CBA方法制备得到，能够在很大程度上保留AChR的天然构象，较少产生非特异性吸附和交叉反应，且具有灵敏度高、特异性强的特点。本发明还公开了上述检测试剂盒的应用，将上述试剂盒用于检测待测血清中是否存在针对AChR单亚基的自身抗体，从而分析其与MG患者疾病严重程度的关系，为临床治疗提供新指标、新方案。也可以将AChR‑Ab按照亚基进行分类并归纳其临床症状，针对这些症状进行对症治疗将是未来AChR‑MG治疗的首选方向。
针对 achr 单亚基抗体检测试剂盒及其应用

[发明专利]一种抗IgLON5自身抗体体外检测方法-CN202211561467.4在审
发明人：吕杰;高峰;赵雪;张婧;张迎娜;方华;张琳媛;陈姝帆;孙展 -专利权人：郑州大学
申请日： 2022-12-07 - 公布日： 2023-01-06 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗IgLON5自身抗体体外检测方法，包括重组表达载体pSJMY‑IgLON5‑GFPC构建及鉴定、验证pSJMY‑IgLON5‑GFPc质粒中IgLON5蛋白真核表达情况、转染细胞的固定、破膜、包备处理、CBA间接免疫荧光方法的建立与验证和筛选应用于临床血清标本的IgLON5抗体等步骤。利用脂质体转染的方式建立基于HEK293细胞的双色间接免疫荧光方法，制备抗IgLON5抗体细胞，测定患者血清中抗IgLON5抗体，维持了蛋白的空间构象，提高检测的特异性，对患者的早期诊断和疗效评价均有明确的指导意义，且提出的检测方法中所使用试剂均为常规试剂，检测成本较低，检测周期短，有利于临床上的推广与应用，有助于重症肌无力致病机制研究的开展并且具有作为疾病生物标志物的潜在功能，为后续辅助患者精准诊疗提供指导。
一种 iglon5 自身抗体体外检测方法

[发明专利]体外检测MUSK-Ab和LRP4-Ab的方法及试剂盒-CN201810989134.9有效
发明人：高峰;韩姣姣;李明强;张迎娜;张婧;赵雪;吕杰;方华 -专利权人：河南省医药科学研究院
申请日： 2018-08-28 - 公布日： 2021-11-19 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明涉及一种体外检测MUSK‑Ab和LRP4‑Ab的方法及试剂盒。该方法包括以下步骤：取293T细胞，将293T细胞转染pCMV6‑AC‑GFP‑MuSK重组质粒和/或pCMV6‑AC‑GFP‑LRP4重组质粒；向转染pCMV6‑AC‑GFP‑MuSK重组质粒的转染细胞和/或转染pCMV6‑AC‑GFP‑LRP4重组质粒的转染细胞添加多聚甲醛后固定15～30min；磷酸盐缓冲液洗涤之后添加牛血清白蛋白和TritonX‑100进行封闭、通透2～3h；取待测血清，添加封闭、通透后的pCMV6‑AC‑GFP‑MuSK重组质粒的转染细胞和/或封闭、通透的pCMV6‑AC‑GFP‑LRP4重组质粒的转染细胞中，24～28℃下孵育45min～2h，磷酸盐缓冲液洗涤之后加入Alexa FluorTM568标记的羊抗人IgG，24～28℃下孵育45min～2h，磷酸盐缓冲液洗涤后使用荧光显微镜的蓝色激发光和绿色激发光激发，观察并拍照记录。所使用试剂均为常规试剂，不需要依赖价格昂贵的试剂盒，检测成本较低。
体外检测 musk ab lrp4 方法试剂盒

[发明专利]一种检测免疫性坏死性肌病血清抗HMGCR抗体的方法-CN202110105865.4在审
发明人：吕杰;韩森森;高峰;张婧;赵雪;张迎娜;方华;张琳媛;杨浩楠;王淑敏;王璐璐;贺笑笑;周淑娴;纪莹 -专利权人：郑州大学
申请日： 2021-01-26 - 公布日： 2021-04-20 - 主分类号： G01N33/573 文献下载
摘要：本发明提供了一种检测免疫性坏死性肌病血清抗HMGCR抗体的方法，该检测方法首先获取得到HMGCR基因，并通过分子生物学方法与重组荧光标签pSJMY‑mCherry载体构建得到具有红珊瑚荧光性质的pSJMY‑H‑mCherry载体，并将上述载体瞬时转染HEK293T细胞，然后将转染细胞中表达得到的HMGCR蛋白抗原与待测血清进行免疫反应。本发明利用红色荧光蛋白基因构建的双色间接免疫荧光检测人体内抗HMGCR抗体，具有灵敏度高的特点，对患者的早期诊断和疗效评价均有明确的指导意义，具有显著的社会效益和巨大的经济效益。
一种检测免疫性死性血清 hmgcr 抗体方法

[发明专利]用于表达Agrin蛋白的重组质粒及其构建方法和应用-CN202011178314.2在审
发明人：高峰;王淑敏;张迎娜;杨浩楠;吕杰;张婧;赵雪;王璐璐;方华 -专利权人：河南省医药科学研究院
申请日： 2020-10-29 - 公布日： 2021-01-26 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明属于基因工程技术领域，具体涉及用于表达Agrin蛋白的重组质粒及其构建方法和应用。本发明通过重叠延伸RT‑PCR获得Agrin全长基因片段，重组至真核表达质粒上，从而可以高效地在真核细胞中表达Agrin蛋白，并且以上述表达的Agrin蛋白作为抗原与血清中的Agrin抗体进行高效结合，所使用试剂均为常规试剂，检测成本较低，并且有助于重症肌无力致病机制研究的开展并且具有作为疾病生物标志物的潜在功能，为后续辅助患者精准诊疗提供指导。
用于表达 agrin 蛋白重组质粒及其构建方法应用

[发明专利]用于表达THBS4蛋白的真核表达质粒、构建方法及应用-CN201911153835.X在审
发明人：高峰;杨浩楠;吕杰;王淑敏;张婧;韩姣姣;王璐璐;张迎娜;赵雪;方华 -专利权人：河南省医药科学研究院
申请日： 2019-11-22 - 公布日： 2020-02-04 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于表达THBS4蛋白的真核表达质粒、构建方法及应用，该真核表达质粒含有用于表达THBS4蛋白的基因片段，该用于表达THBS4蛋白的真核表达质粒的构建方法包括以下步骤：对含有THBS4基因的质粒进行双酶切，电泳并胶回收，得到回收产物THBS4目的片段；对pENTER质粒进行双酶切，电泳并胶回收，得到pENTER载体片段；将THBS4目的片段和pENTER载体片段使用T4连接酶进行连接，得到连接产物；将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞并扩大培养，提取质粒即得。可用于THBS4蛋白表达，从而得到纯化的THBS4蛋白，有助于后续MG这类慢性肌肉疾病致病机制的研究的开展并且具有作为疾病生物标志物的潜在功能，为后续辅助患者的精准诊疗提供指导。
大肠杆菌DH5 α 真核表达质粒蛋白质粒电泳连接产物目的片段载体片段胶回收双酶切构建慢性肌肉疾病感受态细胞生物标志物蛋白表达回收产物基因片段扩大培养潜在功能致病机制可用诊疗基因疾病转化应用研究

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