本发明提供了检测宠物源性人兽共患病原的多重PCR引物探针及试剂盒，本发明对属于宠物源性人兽共患病原的汉赛巴尔通体、刚地弓形虫，布鲁氏菌基因序列分析和比对，设计了适于单反应同时检测这3种病原的三重荧光PCR检测引物和探针，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑9所示，本发明还提供了对上述3种病原进行检测的方法和检测试剂盒。本发明的检测方法简化了原有2/3以上的检测工作量，并缩短检测时间1小时左右，对于汉赛巴尔通体、刚地弓形虫，布鲁氏菌的检测灵敏度分别为5、5、50个拷贝。对临床常见23种病原体以及犬、猫染色体均无非特异扩增，显示出良好的特异度。
本发明提供一种检测2019新型冠状病毒的双靶位点反转录荧光PCR引物、探针及试剂盒，通过对2019新型冠状病毒全基因组进行核酸序列比对，找到了该病毒N基因中3条特异性核酸序列W1、W2、W3，序列分别如SEQ ID NO.1‑3所示，针对3个靶位点，分别设计多对引物探针，发现将针对W1和W2的靶点设计的引物探针组合(序列分别如SEQ ID NO.4‑6、SEQ ID NO.7‑9所示)进行双靶位点反转录荧光PCR，能够特异、灵敏地检测2019新型冠状病毒，检测灵敏度在10个拷贝以内，对临床常见22种呼吸道病原体均无非特异扩增，可有效避免单靶点突变造成的假阴性结果，具有良好的标本检测能力。
本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及鉴别铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌的方法。本发明通过对铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌的基因组序列进行分析，提供了用于高分辨熔解曲线技术鉴别铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌的特异性引物对，其序列如SEQ ID NO.1‑2所示。在此基础上，建立了利用高分辨熔解曲线技术鉴别铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌的方法。该方法具有较高的灵敏度、特异性和准确性，能够高效检出铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌，具有操作简单、成本低、快速、高通量等优点，可用于临床检测、农业生产、食品安全等领域的假单胞菌的鉴别。
本发明提供了一种利用高分辨熔解曲线鉴别五种皮肤癣菌的方法，属于高分辨熔解曲线分析技术领域。本发明方法采用1对特异性引物，基于实时荧光PCR(Real‑time PCR)熔解曲线鉴别红色毛癣菌、趾间毛癣菌、絮状表皮癣菌、犬小孢子菌、和Microsporum incurvatum。所述1对特异性引物的序列如SEQ ID NO.1‑2所示。本发明灵敏度高、特异性好，检测速度快，可用于临床诊断、环境监测、食品安全等方面对皮肤癣菌的鉴别，从而为皮肤癣菌的感染治疗、环境卫生和食品安全的监测提供确实可靠的依据。
本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及鉴别单核细胞增生李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌和英诺克李斯特氏菌的方法。本发明通过对单核细胞增生李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌和英诺克李斯特氏菌的基因组序列进行分析，提供了用于高分辨熔解曲线技术鉴别单核细胞增生李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌和英诺克李斯特氏菌的特异性引物对，其序列如SEQ ID NO.1‑2所示。在此基础上，建立了利用高分辨熔解曲线技术鉴别三种李斯特氏菌的方法，具有较高的灵敏度、特异性和准确性，能够高效检出上述三种李斯特氏菌，具有操作简单、成本低、快速、高通量等优点，可用于临床检测、农业生产、食品安全等领域的李斯特氏菌的鉴别。
本发明提供了一种鉴别四种镰刀菌的方法，属于高分辨熔解曲线分析技术领域。本发明方法采用1对特异性引物，基于实时荧光PCR(RT‑PCR)熔解曲线鉴别层生镰刀菌，尖孢镰刀菌，半裸镰刀菌，腐皮镰刀菌，所述1对特异性引物的序列如SEQ ID NO.1‑2所示。本发明灵敏度高、特异性好，检测速度快，可用于临床诊断、农业生产、食品安全等方面镰刀菌种的鉴别，从而为镰刀菌的感染治疗、农业生产和食品安全的监测提供确实可靠的依据。
