本发明公开了一种HYR‑PB21有效成分血药浓度的定量分析方法，涉及药物分析技术领域，HYR‑PB21有效成分包括布比卡因和双羟萘酸，包括以下步骤：配制HYR‑PB21有效成分标准曲线样品和质控品样品，用混合内标溶液沉淀后，进样检测，建立标准曲线、获得回归方程；将血浆样品采用混合内标溶液沉淀后，进样检测，按回归方程计算布比卡因、双羟萘酸的血药浓度；采用UPLC‑MS/MS法检测；其中，高效液相色谱条件为：色谱柱为Phenomenex Luna Omega C18色谱柱；流动相A为pH＝5.7的体积分数为0.1％甲酸水溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱。本发明可实现一次分析同时完成两种有效成分的定量检测，检测灵敏度高、准确率高、分析速度快，为HYR‑PB21药物的临床药动学研究提供基础。
