本申请涉及一种新型冠状病毒的重组抗原、单克隆抗体及制备方法和应用。所述重组抗原为新型冠状病毒的重组N蛋白,且所述重组抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。所述单克隆抗体制备时采用的免疫原为所述的重组抗原,且所述单克隆抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示,所述单克隆抗体的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。本申请实现了新型冠状病毒的重组抗原(重组N蛋白)的原核表达,采用所述重组抗原作为免疫原制备的单克隆抗体与新型冠状病毒的亲和力强、特异性高,为建立免疫学分析方法快速检测新型冠状病毒提供重要的原料,应用前景优异。