双启动子DNA疫苗表达载体pCMVnir及其制备方法,属于DNA疫苗技术领域。双启动子DNA疫苗表达载体pCMVnir为双股闭环DNA分子,是一种基因克隆的载体,长度为5.1Kb,用于表达制备基因工程产品和生产DNA疫苗,含有两种启动子,一种是真核细胞启动子HCMV IE启动子,另一种为大肠杆菌硝酸盐还原酶基因启动子nirB,分别在真核细胞和原核细胞中被激活表达相应的蛋白,含有多克隆酶切位点,用以插入外源基因,该载体具有SEQ ID NO 1所示的序列。本发明的疫苗载体可用于高效表达外源基因,而不需要在培养体系中加入诱导剂。