本发明提供了一种检测齿兰环斑病毒的引物组及其使用方法和应用，本发明属于分子生物学技术领域。本发明提供的检测齿兰环斑病毒的引物组的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，荧光探针P的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示。本发明的引物组可以快速、灵敏、准确的检测出齿兰环斑病毒。
本发明公开了一种基于数字PCR定量检测齿兰环斑病毒的方法，包括如下步骤：步骤一：待检样品前处理；步骤二：配置反应液：包括ddPCR Supermix for Probes、上下游引物、探针、模板和ddH2O；所述上下游引物和探针；步骤三：制备微滴；步骤四：PCR扩增，将反应板放入伯乐PCR仪中进行扩增。步骤五：检测微滴，PCR反应后，将样本板在电脑上设置成功后，放入QX200Droplet微滴分析仪中，进行微滴分析检测，有荧光信号的微滴为阳性，无荧光信号的微滴为阴性。本发明不需要建立标准曲线，可以进行绝对定量；对ORSV的PCR反应分成了数万个独立的PCR反应，既能够精确地检测到单拷贝甚至是低浓度混杂样品，又可以显著降低体系间的影响以及背景序列和抑制物对反应的干扰。
