本发明公开了一种检测甲状腺癌分子分型相关基因突变的文库构建方法,涉及文库构建技术领域。包括以下步骤:从待测样本中提取DNA、用SEQ ID NO.1~37所示的核苷酸序列为引物、使用建库试剂中的通用引物和接头、从待测样本中提取纯化RNA、通过逆转录生成相应的cDNA,纯化cDNA、用SEQ IDNO.38~64所示的核苷酸序列为引物、使用建库试剂中的通用引物和接头,进行第二轮PCR扩增以及对测序文库进行质检。该检测甲状腺癌分子分型相关基因突变的文库构建方法,可以同时检测27个融合变异,这些基因突变及融合变异都与甲状腺癌分子分型有关,因此其检测结果可以用来辅助临床医生为甲状腺癌患者进行分子分型,还可以指导患者靶向用药及预后评估。