本发明公开了鉴别鱼类源性成分的引物及鉴定方法。本发明提供三对特异性引物(SEQ ID NO:1‑6),基于多重实时荧光PCR熔解曲线鉴别鱼类或鱼肉制品中是否含有蓝鳍金枪鱼、银鳕鱼、油鱼三种动物源性成分。本方法具有检测精准、特异性强、灵敏度高、简便快速的优点,能满足大批量、快速鉴别鱼类或鱼肉制品中是否含有蓝鳍金枪鱼、银鳕鱼、油鱼源性成分的要求,具有巨大市场需求和广阔的应用前景。
本发明涉及生物技术领域,具体公开了同步鉴别食品中多种动物源性成分的多重RT‑PCR预混试剂冻干球及其制备方法与应用。本发明的制备多重RT‑PCR预混试剂冻干球的方法,其中,所述冻干球包括多重荧光PCR反应体系和保护剂,所述多重荧光PCR反应体系包含5对特异性引物组合,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑10所示,所述保护剂包括聚乙二醇8000、Triton X‑100、甘露醇和海藻糖。本发明方法制备的多重RT‑PCR冻干球,可常温运输和储存,能用于鉴别肉或肉制品中是否含有猪、牛、绵羊、山羊、鸡、鸭、狗、狐、貉9种动物源性成分。具有检测准确,操作简便快速高效的优点。
本发明公开了当雄高山牦牛源性成分的鉴别方法。本发明基于11个线粒体SNP位点组合对当雄高山牦牛与其他品种牦牛进行鉴别与区分。本发明采用8对当雄高山牦牛的特异性引物,基于同时进行的2个三重与1个二重实时荧光定量PCR(RT‑PCR)反应,通过比较3个RT‑PCR反应的熔解曲线峰是否存在对应阳性峰型判定该11个SNP位点的基因型,最终判定是否为当雄高山牦牛。所述8对特异性引物的序列如SEQ ID NO:1‑16所示。本方法快速简单,结果直观可靠,对提升当雄高山牦牛产业整体品牌价值,保护牦牛品种多样性以及养殖加工企业利益具有重要意义。