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[发明专利]一种猪流行性腹泻病毒阳性血清的制备方法-CN201710016843.4在审
发明人：詹先强;陈晟生;陈樨;赖婷婷;陈景容;姚尧;元丽花;赖道华;黄玉婷 -专利权人：福州大北农生物技术有限公司
申请日： 2017-01-11 - 公布日： 2017-05-24 - 主分类号： C07K16/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒阳性血清的制备方法，首先用猪流行性腹泻病毒抗原对实验用动物进行基础免疫，再用猪流行性腹泻病毒灭活疫苗对实验用动物进行3‑5次免疫，而后无菌采集动物血清，以细胞中和抗体效价检测法检测，确认血清抗体为阳性且细胞中和抗体效价在1256以上，即收获猪流行性腹泻病毒阳性血清。本发明是利用猪流行性腹泻病毒和实验动物兔、豚鼠，按照一定免疫程序免疫接种制备高免血清作为样品，通过对实验动物采血分离血清，血清经过辐照、过滤、检验、分装、冻干等工艺过程，并最终用于鉴别、检验和诊断过程中。本发明方法减小了用猪制备阳性血清因同源动物而引起的同源其他外源病毒污染的风险。
种猪流行性腹泻病毒阳性血清制备方法

[发明专利]一种猪传染性胃肠炎病毒阳性血清的制备方法-CN201710016816.7在审
发明人：詹先强;陈晟生;陈樨;赖婷婷;陈景容;姚尧;元丽花;赖道华;黄玉婷 -专利权人：福州大北农生物技术有限公司
申请日： 2017-01-11 - 公布日： 2017-05-10 - 主分类号： C07K16/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪传染性胃肠炎病毒阳性血清的制备方法，首先用猪传染性胃肠炎病毒抗原对实验用动物进行基础免疫，再用猪传染性胃肠炎病毒灭活疫苗对实验用动物进行3‑5次免疫，而后无菌采集动物血清，以细胞中和抗体效价检测法检测，确认血清抗体为阳性且细胞中和抗体效价在1512以上，即收获猪传染性胃肠炎病毒阳性血清。本发明是利用猪传染性胃肠炎病毒和实验动物兔、豚鼠，按照一定免疫程序免疫接种制备高免血清作为样品，通过对实验动物采血分离血清，血清经过辐照、过滤、检验、分装、冻干等工艺过程，并最终用于鉴别、检验和诊断过程中。本发明方法减小了用猪制备阳性血清因同源动物而引起的同源其他外源病毒污染的风险。
种猪传染性胃肠炎病毒阳性血清制备方法

[发明专利]一种猪圆环病毒灭活疫苗效力检验方法-CN201610036512.2在审
发明人：吴润生;陈晟生;陈景容;林拱阳;詹先强;朱鸿杰;苏国华;祝志刚;吴金妃 -专利权人：福州大北农生物技术有限公司
申请日： 2016-01-20 - 公布日： 2016-05-25 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪圆环病毒灭活疫苗效力检验方法，首先用猪圆环病毒灭活疫苗对实验用动物进行1--2次免疫，而后无菌采集动物血清，经灭活后，用维持液对无菌采集的免疫动物血清做倍比稀释，并用含200TCID₅₀/0.1mL的猪圆环病毒抗原于37℃环境下中和30-60min，将中和液接种于生长PK-15细胞的96孔细胞板中，置37℃的CO₂培养箱中培养后采用间接免疫荧光法进行染色观察，计算血清抗体的中和效价，判定猪圆环病毒灭活疫苗效价。本发明不但能定量检验出猪圆环灭活疫苗经过动物免疫接种后对动物体产生的血清中和抗体效价，而且抗原批间差异小，检验结果准确。
种猪圆环病毒疫苗效力检验方法

[发明专利]一种重组猪圆环病毒衣壳蛋白包涵体的分离纯化方法-CN201410324737.9有效
发明人：吕暾;王立波;乔春晓;王伟东;庄星来;洪晶;林拱阳;陈晟生 -专利权人：福州大学;福州大北农生物技术有限公司
申请日： 2014-07-09 - 公布日： 2014-10-22 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组猪圆环病毒衣壳蛋白包涵体的分离纯化方法。本发明在诱导产生包涵体后，通过优化的裂解方法破碎菌体，初步去除了一部分杂质，接着通过对包涵体进行一系列处理，使得包涵体形成可溶性目标蛋白，避免了使用尿素、盐酸胍等变性剂对包涵体的变性溶解和复性。而镍柱亲和层析使得可以纯化获得的蛋白量比较大，具有纯度高，操作简单等优点。本发明从不溶性包涵体中分离纯化出来可溶性的目的蛋白，避免了反复变性复性的繁琐步骤以及复性过程中的蛋白沉淀的危险，并且所获得的蛋白纯度可以达到电泳纯。
一种重组圆环病毒蛋白包涵分离纯化方法

[发明专利]优化的猪圆环病毒ORF2基因的NLS序列-CN201410061721.3无效
发明人：吕暾;陈灵艳;林拱阳;陈晟生;陈先进;俞建萍;黄艺珠 -专利权人：福州大北农生物技术有限公司;福州大学
申请日： 2014-02-24 - 公布日： 2014-09-10 - 主分类号： C12N15/34 文献下载
摘要：本发明公开了优化的猪圆环病毒ORF2基因的NLS序列，所述NLS序列为SEQIDNO．1。所述优化的猪圆环病毒ORF2基因在大肠杆菌中表达。本发明采用以上技术方案，通过优化的猪圆环病毒ORF2基因的NLS序列，使优化后的猪圆环病毒ORF2基因能够在大肠杆菌中成功获得表达。
优化圆环病毒 orf2 基因 nls 序列

[发明专利]优化的猪圆环病毒ORF2截短基因-CN201410061725.1有效
发明人：吕暾;陈灵艳;陈晟生;林拱阳;乔春晓;俞建萍;包松英 -专利权人：福州大北农生物技术有限公司;福州大学
申请日： 2014-02-24 - 公布日： 2014-06-04 - 主分类号： C12N15/34 文献下载
摘要：本发明公开了优化的猪圆环病毒ORF2截短基因，所述基因的核苷酸序列为SEQIDNO．1。所述基因在枯草芽孢杆菌中表达。所述枯草芽孢杆菌为BS168或WB800。本发明采用以上技术方案，通过将去除NLS片段并根据密码子偏好性优化后的截短基因，能够成功的在枯草芽孢杆菌中得到表达。
优化圆环病毒 orf2 基因

[发明专利]一种简易提取卵黄抗体的方法-CN201310558667.9有效
发明人：陈景容;赖道华;陈晟生;詹先强 -专利权人：福州大北农生物技术有限公司
申请日： 2013-11-12 - 公布日： 2014-02-05 - 主分类号： C07K16/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种简易提取卵黄抗体的方法，所述的提取方法包括以下步骤：1）将蛋黄与蛋白分离；2）在上述的蛋黄中依次加入PBS缓冲液和氯仿，得混合液，将混合液在-15-25℃下冷冻3-8h后移至30-40℃下解冻，反复冻融三次以上；3）将上述反复冻融后的混合液放入37℃水浴锅中水浴25-35min，水浴的过程中要轻轻摇动容器，使蛋黄、PBS缓冲液和氯仿进一步混合均匀得混匀液；4）将上述的混匀液在2-8℃下静置3-5h，混匀液分层，取得上层的上清液即为含卵黄抗体的液体。本发明的方法工艺简单，易于操作，提取率高，成本低，适宜于工业化大量生产时使用。
一种简易提取卵黄抗体方法

[发明专利]一种疫苗生产厂家内控SPF蛋质量的快速检测方法-CN201210448590.5有效
发明人：陈景容;吴润生;陈晟生;赖道华 -专利权人：福州大北农生物技术有限公司
申请日： 2012-11-12 - 公布日： 2013-05-29 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：本发明公开了一种疫苗生产厂家内控SPF蛋质量的快速检测方法，其包括以下步骤：1）在无菌条件下将SPF蛋的蛋黄和蛋白混合；2）将混合的蛋黄和蛋白下反复冻融三次以上；3）将冻融后的混合样与PBS缓冲液混合均匀；4）将混合均匀的混合液离心，取上层清液备用；5）采用ELISA试剂盒检测步骤4）得到的上层清液中五种病的抗原。采用本发明的疫苗生产厂家内控SPF蛋质量的快速检测方法，不需到SPF鸡舍采集种鸡血液进行检测SPF蛋的质量，由SPF蛋中的蛋白和蛋黄即可快速检测SPF蛋内不易检测到的五种病毒，方便SPF蛋的疫苗生产厂家在应用SPF蛋之前检测SPF蛋的质量检测，减少生产风险。
一种疫苗生产厂家内控 spf 质量快速检测方法

[发明专利]一种猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清的制备方法-CN201210449829.0有效
发明人： 陈晟生;詹先强;陈景容 -专利权人：福州大北农生物技术有限公司
申请日： 2012-11-12 - 公布日： 2013-05-29 - 主分类号： G01N33/531 文献下载
摘要：本发明涉及一种猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清的制备方法。其包括选兔、免疫接种、采集兔血清。本发明通过猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫兔制备阳性血清，通过兔体对猪繁殖与呼吸综合征病毒刺激所产生免疫反应获得免疫抗体——阳性血清，减小了用猪制备阳性血清因同源动物而引起的同源其他外源病毒污染的风险，为阳性血清的制备提供了新的思路，此外使用兔子作为实验动物跟猪相比，也降低了经济成本。
种猪繁殖呼吸综合征病毒阳性血清制备方法

[发明专利]一种猪圆环病毒灭活疫苗的灭活检验方法-CN201210449979.1有效
发明人： 陈晟生;郑艺明 -专利权人：福州大北农生物技术有限公司
申请日： 2012-11-12 - 公布日： 2013-05-29 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种猪圆环病毒灭活疫苗的灭活检验方法，包括以下步骤：1)将灭活后的猪圆环病毒液在PK-15细胞上吸附40min；2)吸附后，在细胞瓶中加入营养维持液，将细胞瓶置于37℃的CO2培养箱中继续培养3天后，收获细胞培养液，并冻融3次；3)连续盲传3代，做荧光抗体染色，以PK-15健康细胞作阴性对照，在荧光显微镜下观察判定，以不出现特异性的绿色荧光为合格样品，出现特异性的绿色荧光为不合格样品。本发明既能使可能未灭活彻底的病毒充分繁殖而被检出，又能避免灭活后的猪圆环病毒液直接接种PK-15细胞引起细胞死亡脱落的问题，因而能更准确检验出经过灭活后的抗原是否被彻底灭活。
种猪圆环病毒疫苗活检验方

[发明专利]一种SPF蛋外源病毒的检验方法-CN201210448180.0有效
发明人：陈景容;吴润生;陈晟生;赖道华 -专利权人：福州大北农生物技术有限公司
申请日： 2012-11-12 - 公布日： 2013-05-29 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：本发明公开了一种SPF蛋外源病毒的检验方法，包括鸡胚检查法和细胞检查法，其中，鸡胚检查法为：孵化SPF蛋，取9-12日龄鸡胚，并收集尿囊液测血凝，观察鸡胚是否病变，大小是否正常；细胞检查法为：孵化SPF蛋，取9-12日龄鸡胚细胞进行细胞培养，接种尿囊液和卵黄，盲传二代，观察接种后细胞的病变情况，收集部分细胞反复冻融做5种病的抗原检测和做红细胞吸附检验。采用本发明的检验方法，不需到SPF鸡舍采集种鸡血液进行检测SPF蛋的质量，只需采用SPF蛋本身就可检测SPF蛋是否存在外源病毒，进而确认SPF蛋的质量，减少进出SPF鸡舍造成的生物安全风险，便于SPF蛋的应用对象进行SPF蛋外源病毒的检测。
一种 spf 蛋外源病毒检验方法

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