本发明公开了一种免分离的血浆中肿瘤来源细胞外囊泡检测方法,涉及生物技术领域,探针包括CD63、HER2、GPC1或/和EpCAM;探针序列分别如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.4所示;该探针在免分离的血浆中细胞外囊泡检测试剂中的应用,单EVs成像分析,直接稀释血浆后检测单个EV的图像,进行动态免疫检测,统计特异性结合的EVs的数量。本发明将免分离的细胞外囊泡检测探针应用于免疫检测试剂中,避免了对血浆EVs的分离过程,无需使用荧光检测,就能够对单个EVs结合动力学进行表征,能够在350个背景颗粒中检测到1个靶标EVs。