本发明公开了一种检测BVDV、BCoV、BRV和IBRV的多重荧光定量PCR方法及试剂盒，属于兽医生物诊断技术领域。本发明提供的引物组核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑SEQ IDNO.8所示，其实现了对牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、牛轮状病毒和牛传染性鼻气管炎病毒的同时、定量检测，该检测方法灵敏度高，特异性好，适用于临床样品的检测。
本发明提供了一种重组基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提供了一种如SEQ ID No.1所示重组基因编码得到的重组蛋白。本发明还提供了一种如上所述的重组蛋白在检测牛副结核杆菌中的应用，主要是作为包被抗原使用。本发明还提供了一种检测牛副结核杆菌的试剂盒，包括：如上所述的重组蛋白、包被液、洗涤液、封闭液、稀释液、辣根过氧化物酶标记的兔抗牛IgG和底物显色液。本发明以SEQ ID No.1所示的重组基因编码获得的重组蛋白作为包被抗原，采用间接ELISA检测牛副结核杆菌，具有较好的特异性、敏感性及重复性，结果直观准确。
