本发明涉及诊断试剂盒,特别是涉及一种用于同时检测多种致猪死亡的病原微生物的引物探针组、试剂盒及其应用。本发明提供了一种同时检测多种致猪死亡的病原微生物的引物探针组,所述引物探针组的核苷酸序列如SEQ IDNO.1~SEQ ID NO.90所示。采用本发明所述引物探针组能够快速、准确、高通量检测猪发病或致死病原。而且在猪发病或死亡病因未知时,或者只知晓大体临床性状如消化系统疾病但不清楚病原时,采用本发明所述引物探针组可以快速锁定是否感染可致猪死亡的病原,有利于及时准确的临床用药,避免更多的猪感染或死亡。