一种重组海参溶菌酶的生产方法及由其制得的重组海参溶菌酶,该方法是将海参溶菌酶基因(SEQ ID NO.1)连接到真核表达载体pPIC9K中构建重组质粒,并将所形成的重组质粒转化到毕赤酵母SMD1168中,经甲醇诱导表达,然后经阳离子交换树脂层析柱纯化后得到重组溶菌酶。本发明的方法采用该基因工程菌生产溶菌酶适合大规模培养和分离提取,生产工艺不复杂,设备要求简单,生产周期短,成本比较低,无环境污染。所制得的重组海参溶菌酶比直接从海参组织中提取的溶菌酶活性提高了30%;与鸡蛋清溶菌酶相比,抑菌谱范围要广很多,尤其对于鸡蛋清溶菌酶不能作用的革兰氏阴性菌抑菌效果更明显。