本发明公开了一种引物对及其试剂盒和在检测水体中福寿螺(Pomacea spp.)生物量中的应用，其qPCR引物对的DNA序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。本发明将环境DNA技术应用于入侵调查研究，在获取水体中的环境DNA时，只需在目标水体一定范围内进行水样的采集，与传统方法相比，不需要进行大量物种的外表鉴定，对于繁杂的环境，减小了工作难度，节省大量的人力财力。同时本发明成功的构建了不同密度福寿螺的eDNA与qPCR反应的Cq值之间关系的数学模型，为开展福寿螺生物量、种群密度的评估及其分布现状的调查提供了技术支撑和理论依据，对福寿螺的入侵危害程度评价及防控具有重要意义。
本发明公开了一种特异性引物组合及其试剂盒和在检测福寿螺中的应用，特异性引物组合的DNA序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。本发明还公开了所述特异性引物在制备检测福寿螺的试剂或试剂盒、区分小管福寿螺和斑点福寿螺中的应用以及一种区分小管福寿螺和斑点福寿螺的方法。本发明从分子水平，依据两种福寿螺线粒体COI基因设计出3条引物，利用这3条引物，再利用多重PCR技术进行扩增，结果显示这3条引物的扩增结果能够有效快速地区分出两种福寿螺。同时该引物对于不同的福寿螺以及同种福寿螺的重复均体现出较好的稳定性，保证了鉴定结果的准确性，说明该套引物具有较高的灵敏度。
本发明公开了一种三叶斑潜蝇(Liriomyza trifolii)的特异性引物对，其序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了一种基于环境DNA检测植物叶片中三叶斑潜蝇(Liriomyza trifolii)为害的方法，包括以下步骤：将含有昆虫潜道的植物叶片进行DNA提取、PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳检测，当检测结果为有电泳条带且条带位置为750bp时，表明有三叶斑潜蝇为害；否则为没有三叶斑潜蝇为害。本发明涉及的三叶斑潜蝇环境DNA检测方法能够在潜道中检测到三叶斑潜蝇为害的发生，确定了检测到时间阈值和检测方法，这将在斑潜蝇鉴定及田间预警监测应用中具有重要的意义。
