本发明涉及分子生物学与生物医药技术领域,具体地说,本发明涉及针对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的人工miRNA(articifical miRNA,amiRNA)及其组合在治疗HBV感染疾病中的应用。本发明利用生物信息学和分子生物学的方法针对HBV不同基因型的保守区分别设计和构建了amiRNA及其真核表达载体,通过体内外筛选发现了17条可显著抑制HBV复制的amiRNA及其不同的amiRNA组合。因此,本发明涉及的amiRNA及其组合有望成为治疗乙型肝炎病毒相关疾病的新型治疗药物和手段。