本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种调控菊花花期的基因、表达载体和应用。本发明所述基因CmbHLH110，具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。本发明利用所述基因CmbHLH110构建植物表达载体，将所述植物表达载体转化入菊花材料中，得到转基因菊花材料。通过表型观察及分析获得具有开花时间差异的转基因菊花株系。结果发现，与未转基因植株相比，转入CmbHLH110基因的植株在短日照下提前开花，抑制CmbHLH110基因表达的植株在短日照下推迟开花，即CmbHLH110基因可以显著改变菊花开花时间。
本发明公开了一种基因CmBZS1在创制托桂花型菊花中的应用，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1，该基因CmBZS1的定向干扰序列amiR‑CmBZS1，其核苷酸序列为SEQ ID NO.16。本发明首次提出基因CmBZS1在改变菊花花型中的应用，尤其是在创制托桂花型菊花中的应用，还公开了一种创制托桂花型菊花的方法。首次设计得到的定向干扰序列amiR‑CmBZS1可以改变菊花花瓣形状，促进菊花的管状花花瓣伸长，形成花瓣为桂瓣型的菊花，在定向培育托桂型菊花中具有重要意义，大幅提高了桂瓣型菊花育种效率、缩短了培育时间，在开发分子标记、改良菊花花型、完善菊花花型转基因育种技术方面有较大的应用价值。
本发明公开了一种荧光定量PCR鉴定菊花内、外源基因拷贝数的引物对及方法。PGK基因作为内参基因在荧光定量PCR鉴定菊花内、外源基因拷贝数中的应用。一种应用于荧光定量PCR鉴定菊花内、外源基因拷贝数的内源基因扩增引物对，正向引物序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物序列如SEQ ID NO.2所示。本发明可以快速、准确、高效的鉴定菊花内源基因拷贝数和转基因菊花转内源、转外源基因拷贝数。通过本发明提供的检测引物和方法，以菊花和转基因菊花为实验材料，根据待检测拷贝数的基因和内源参照基因PGK的CT值比较分析，即可得出菊花内源基因拷贝数和转基因菊花所转基因拷贝数。该检测方法为复杂基因组基因的拷贝数鉴定提供了新思路，大大提高了检测基因拷贝数的效率。
本发明公开了一种提高菊花抗蚜性的基因CmMYB15‑like、植物表达载体及其构建方法和应用。其中，该基因具有如SEQ ID NO：1所示的序列，其通过上调4‑香豆酸辅酶A连接酶的基因表达水平，调控木质素合成从而增加细胞壁厚度，提高菊花抗蚜性。同时，以该基因构建了相应的植物表达载体；所述基因及其植物表达载体可用于培育抗蚜转基因植物，具体以菊花‘神马’为材料获得抗蚜性基因CmMYB15‑like，构建其植物表达载体，通过农杆菌介导法导入菊花‘神马’。对转基因植株及野生型进行蚜虫接种处理，表明转基因植株的抗蚜性明显增强，为菊花抗蚜性工程育种提供优异基因储备和新的策略。
本发明公开了一种与菊花脑抗蚜性相关的miRNA160a及其应用，所述的miRNA160a具有序列表中SEQ ID NO.1所示的序列特征，可利用该miRNA进行抗蚜转基因植物的培育，进而提高植物的抗蚜性；通过TRV‑VbMS技术，在菊花脑中过表达含有SEQ ID NO.2所示的内源目的miR160a结合位点的STTM序列片段的TRV2e病毒沉默表达载体质粒，借助抽真空法瞬时转化菊花脑，诱导菊花脑内源目的miR160a发生沉默，从而鉴定该内源目的miR160a的功能。本发明方法提供了一种提高植物抗蚜性的miRNA160a，并提供了TRV‑VbMS沉默菊花脑内源miRNA从而鉴定miRNA功能的体系，其具有快速，高通量，易于操作等优势，为开展菊花脑miRNA功能研究提供了新途径。
