本发明公开了试剂盒及其在构建COL2A1基因突变的Ⅱ型胶原蛋白病模型猪核移植供体细胞中的应用。本发明提供了SEQ ID NO:16所示COL2A1‑gRNA3、SEQ ID NO:17所示COL2A1‑gRNA4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用。本发明还提供了制备重组猪细胞的方法:将COL2A1‑gRNA3、COL2A1‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞,得到重组猪细胞。所述重组猪细胞为COL2A1基因发生突变的重组猪细胞。试剂盒的用途为:制备重组猪细胞;制备Ⅱ型胶原蛋白病模型猪;制备Ⅱ型胶原蛋白病细胞模型或Ⅱ型胶原蛋白病组织模型或Ⅱ型胶原蛋白病器官模型。本发明对于Ⅱ型胶原蛋白病药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明公开了基因编辑系统在构建CFTR基因突变的囊性纤维化模型猪核移植供体细胞中的应用。本发明提供了SEQ ID NO:16所示CFTR‑gRNA1、SEQ ID NO:17所示CFTR‑gRNA3和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用。本发明还提供了制备重组猪细胞的方法:将CFTR‑gRNA1、CFTR‑gRNA3和NCN蛋白共转染猪细胞,得到重组猪细胞。所述重组猪细胞为CFTR基因发生突变的重组猪细胞。试剂盒的用途为:制备重组猪细胞;制备囊性纤维化模型猪;制备囊性纤维化细胞模型或囊性纤维化组织模型或囊性纤维化器官模型。本发明对于囊性纤维化药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明公开了用于构建NF1基因突变的I型神经纤维瘤病模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了一种制备重组细胞的方法:用SEQ ID NO:18所示的DNA分子取代猪细胞的染色体DNA中SEQ ID NO:19所示的DNA分子,得到重组猪细胞。本发明采用CRISPR/Cas9技术联合ssODN同源重组技术进行了NF1基因的的定向基因编辑,模拟I型神经纤维瘤病的自然发病遗传特征,并获得了NF1基因定向突变的单细胞克隆,为后期通过体细胞核移植动物克隆技术培育I型神经纤维瘤病模型猪奠定了基础。
本发明公开了基因编辑系统及其在制备SCN5A基因突变的心率失常模型猪核移植供体细胞中的应用。本发明提供了一种制备重组细胞的方法:用SEQ ID NO:18所示的DNA分子取代猪细胞的染色体DNA中SEQ ID NO:19所示的DNA分子,得到重组猪细胞。本发明采用CRISPR/Cas9技术联合ssODN同源重组技术进行了SCN5A基因的的定向基因编辑,模拟心率失常的自然发病遗传特征,并获得了SCN5A基因定向突变的单细胞克隆,为后期通过体细胞核移植动物克隆技术培育心率失常模型猪奠定了基础。
本发明公开了基因编辑系统及其在构建HPS1基因突变的海普综合症模型猪核移植供体细胞中的应用。本发明提供了SEQ ID NO:16所示HPS1‑gRNA1、SEQ ID NO:17所示HPS1‑gRNA4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用。本发明还提供了制备重组细胞的方法:将HPS1‑gRNA1、HPS1‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞,得到重组细胞。所述重组细胞为HPS1基因发生突变的重组细胞。试剂盒的用途为:制备重组细胞;制备海普综合症模型猪;制备海普综合症细胞模型或海普综合症组织模型或海普综合症器官模型。本发明对于海普综合症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明公开了用于构建ATM基因突变的共济失调‑毛细血管扩张症模型猪核移植供体细胞的试剂盒。本发明提供了包括SEQ ID NO:16所示ATM‑gRNA1、SEQ ID NO:17所示ATM‑gRNA4和NCN蛋白的试剂盒。本发明还提供了制备重组细胞的方法:将ATM‑gRNA1、ATM‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞,得到重组细胞。所述重组细胞为ATM基因发生突变的重组细胞。试剂盒的用途为:制备重组细胞;制备共济失调‑毛细血管扩张症模型猪;制备共济失调‑毛细血管扩张症细胞模型或共济失调‑毛细血管扩张症组织模型或共济失调‑毛细血管扩张症器官模型。本发明对于共济失调‑毛细血管扩张症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明公开了基因编辑系统在制备SMN1基因突变的脊髓性肌萎缩症模型猪核移植供体细胞中的应用。本发明提供了SEQ ID NO:16所示SMN1‑gRNA3、SEQ ID NO:17所示SMN1‑gRNA4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用。本发明还提供了制备重组猪细胞的方法:将SMN1‑gRNA3、SMN1‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞,得到重组猪细胞。所述重组猪细胞为SMN1基因发生突变的重组猪细胞。试剂盒的用途为:制备重组猪细胞;制备脊髓性肌萎缩症模型猪;制备脊髓性肌萎缩症细胞模型或脊髓性肌萎缩症组织模型或脊髓性肌萎缩症器官模型。本发明对于脊髓性肌萎缩症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明公开了构建SPR基因突变的墨蝶呤还原酶缺乏症模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了包括SEQ ID NO:16所示SPR‑gRNA1、SEQ ID NO:17所示SPR‑gRNA4和NCN蛋白的试剂盒。本发明还提供了制备重组细胞的方法:将SPR‑gRNA1、SPR‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞,得到重组细胞。所述重组细胞为SPR基因发生突变的重组细胞。试剂盒的用途为:制备重组细胞;制备墨蝶呤还原酶缺乏症模型猪;制备墨蝶呤还原酶缺乏症细胞模型或墨蝶呤还原酶缺乏症组织模型或墨蝶呤还原酶缺乏症器官模型。本发明对于墨蝶呤还原酶缺乏症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明公开了构建ABCA12基因突变的斑色鱼鳞癣模型猪核移植供体细胞的试剂盒及其应用。本发明提供了包括SEQ ID NO:16所示ABCA12‑gRNA1、SEQ ID NO:17所示ABCA12‑gRNA4和NCN蛋白的试剂盒。本发明还提供了制备重组猪细胞的方法:将ABCA12‑gRNA1、ABCA12‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞,得到重组猪细胞。所述重组猪细胞为ABCA12基因发生突变的重组猪细胞。试剂盒的用途为:制备重组猪细胞;制备斑色鱼鳞癣模型猪;制备斑色鱼鳞癣细胞模型或斑色鱼鳞癣组织模型或斑色鱼鳞癣器官模型。本发明对于斑色鱼鳞癣药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明公开了构建ZMPSTE24基因突变的早衰症模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了包括SEQ ID NO:16所示ZMPSTE24‑gRNA2、SEQ ID NO:17所示ZMPSTE24‑gRNA4和NCN蛋白的试剂盒。本发明还提供了制备重组猪细胞的方法:将ZMPSTE24‑gRNA2、ZMPSTE24‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞,得到重组猪细胞。所述重组猪细胞为ZMPSTE24基因发生突变的重组细胞。试剂盒的用途为:制备重组猪细胞;制备早衰症模型猪;制备早衰症细胞模型或早衰症组织模型或早衰症器官模型。本发明对于早衰症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明公开了构建BRCA1基因突变的乳腺癌模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了包括SEQ ID NO:16所示BRCA1‑gRNA3、SEQ ID NO:17所示BRCA1‑gRNA4和NCN蛋白的试剂盒。本发明还提供了制备重组细胞的方法:将BRCA1‑gRNA3、BRCA1‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞,得到重组细胞。所述重组细胞为BRCA1基因发生突变的重组细胞。试剂盒的用途为:制备重组细胞;制备乳腺癌模型猪;制备乳腺癌细胞模型或乳腺癌组织模型或乳腺癌器官模型。本发明对于乳腺癌药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明公开了涉及构建PARK7基因突变的帕金森病模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了SEQ ID NO:16所示PARK7‑gRNA2、SEQ ID NO:17所示PARK7‑gRNA4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用。本发明还提供了制备重组猪细胞的方法:将PARK7‑gRNA2、PARK7‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞,得到重组猪细胞。所述重组猪细胞为PARK7基因发生突变的重组猪细胞。试剂盒的用途为:制备重组猪细胞;制备帕金森病模型猪;制备帕金森病细胞模型或帕金森病组织模型或帕金森病器官模型。本发明对于帕金森病药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明公开了基因编辑系统在制备SLC13A1基因突变低硫酸盐血症模型猪核移植供体细胞中的应用。本发明提供了包括SEQ ID NO:16所示SLC13A1‑gRNA1、SEQ ID NO:17所示SLC13A1‑gRNA2和NCN蛋白的试剂盒。本发明还提供了制备重组猪细胞的方法:将SLC13A1‑gRNA1、SLC13A1‑gRNA2和NCN蛋白共转染猪细胞,得到重组猪细胞。所述重组猪细胞为SLC13A1基因发生突变的重组猪细胞。试剂盒的用途为:制备重组猪细胞;制备模型猪;制备细胞模型或组织模型或器官模型。本发明对于低硫酸盐血症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。
本发明公开了制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良模型猪核移植供体细胞的方法及其专用基因编辑系统。本发明提供了制备重组猪细胞的方法:将HOXC13‑gRNA1、HOXC13‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞,得到重组猪细胞。所述重组猪细胞为HOXC13基因发生突变的重组细胞。本发明提供了包括SEQ ID NO:16所示HOXC13‑gRNA1、SEQ ID NO:17所示HOXC13‑gRNA4和NCN蛋白的试剂盒。试剂盒的用途为:制备重组猪细胞;制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症模型猪;制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症细胞模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症组织模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症器官模型。本发明对于纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。