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[发明专利]一种利用枯草芽孢杆菌高效表达生淀粉α-淀粉酶的方法-CN202310120217.5有效
发明人： 肖亚中;姚动邦;房伟;韩旭东;张学成;方泽民 -专利权人：安徽大学绿色产业创新研究院
申请日： 2023-02-03 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用枯草芽孢杆菌高效表达生淀粉α‑淀粉酶的方法，属于基因工程和生物工程领域。本发明的枯草芽孢杆菌重组菌以pBHVY为载体骨架，以来源于Pontibacillussp.ZY的生淀粉α‑淀粉酶基因为目的基因，以枯草芽孢杆菌WB600为表达宿主，改造了启动子，筛选了信号肽，优化了RBS序列，并对获得的重组菌进行了3‑L罐发酵补料工艺优化。利用本发明枯草芽孢杆菌重组菌可高效表达生淀粉α‑淀粉酶，以其为生产菌株，摇瓶发酵48h，发酵上清液中生淀粉α‑淀粉酶的酶活为4824.2U/mL，经3‑L罐发酵培养后胞外生淀粉α‑淀粉酶的酶活可高达49082U/mL，是目前文献报道的最高水平。
一种利用枯草芽孢杆菌高效表达淀粉淀粉酶方法

[发明专利]一种高比活生淀粉水解酶突变体、其编码基因、表达菌株及其应用-CN202310252562.4在审
发明人： 肖亚中;何玉;房伟;张学成;方泽民 -专利权人：安徽大学
申请日： 2023-03-16 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： C12N9/28 文献下载
摘要：本发明公开了一种高比活生淀粉水解酶突变体、其编码基因、表达菌株及其应用，本发明以稳定性欠佳的α‑淀粉酶Amy为出发酶，经过定点突变，获得了热稳定性提高的突变体Amy:ΔTG/W345A。以玉米生淀粉为底物时，突变体的比酶活为出发酶的85％，在30‑35℃条件下，热稳定性均有大幅度提升，在35℃、pH7.0条件下，半衰期可达到20h。在比酶活接近于出发酶的同时，热稳定性有大幅度提升。该突变体在以玉米生淀粉为底物的制糖工业领域具有潜在应用价值。
一种淀粉水解突变体编码基因表达菌株及其应用

[发明专利]一种酰基辅酶A合成酶突变体、其编码基因、表达菌株及其应用-CN202310136182.4在审
发明人： 肖亚中;杨孝宇;章文霞;房伟;张学成 -专利权人：安徽大学绿色产业创新研究院
申请日： 2023-02-20 - 公布日： 2023-06-30 - 主分类号： C12N9/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种酰基辅酶A合成酶突变体、其编码基因、表达菌株及其应用，本发明以来自海洋未培养微生物来源的酰基辅酶A合成酶为基础，通过Funclib设计突变位点后全基因合成，获得突变基因。含有突变质粒的工程菌诱导表达后，获得比酶活提高且稳定性提升的酰基辅酶A合成酶。以棕榈酸为底物时，突变体的比酶活提高了7.0倍，该突变体在酶法检测游离脂肪酸体外诊断试剂盒中具有潜在应用价值。
一种基辅合成突变体编码基因表达菌株及其应用

[发明专利]一株壳聚糖酶重组菌株及其在壳寡糖制备中的应用-CN202210935828.0在审
发明人：方泽民;李幸;肖亚中;夏雨潇;刘娟娟 -专利权人：安徽大学
申请日： 2022-08-04 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： C12N9/24 文献下载
摘要：本发明公开了一种来源于球托霉菌属的壳聚糖酶基因Csn1、表达载体、重组菌株、将重组菌株生产的壳聚糖酶用在降解壳聚糖制备壳寡糖中的方法及应用。本发明通过将球托霉菌属中的壳聚糖酶基因重组于毕赤酵母工程菌，获得能够高效表达该基因的重组毕赤酵母工程菌株Pichia pastoris GS115/pPIC9K‑Csn1。产壳聚糖酶的重组毕赤酵母工程菌株，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO.M 20221107，保藏日期2022年7月14日。利用本发明所述重组毕赤酵母工程菌株生产的壳聚糖酶纯度高，纯化成本低，水解壳聚糖的产物为壳三糖，应用价值大，有望将本发明壳聚糖酶进行大量制备用于壳三糖的大量生产，具有实际应用价值。
一株壳聚糖重组菌株及其寡糖制备中的应用

[发明专利]一种特异性引物对及其在球托霉菌鉴定中的应用-CN202310032567.6在审
发明人：方泽民;张梦玉;刘娟娟;王小洁;肖亚中 -专利权人：安徽大学
申请日： 2023-01-10 - 公布日： 2023-06-06 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明提出一种特异性引物对及其在球托霉菌鉴定中的应用，具体涉及微生物鉴定技术领域。该特异性引物对由序列为5′‑GGGGTGCTTTACGGCACTC‑3′的正向引物与5′‑AGCCCCGAAAGACTGCACC‑3′的反向引物组成，配对使用能够从球托霉菌存在的各类混合样本的DNA中直接扩增出长度约547bp的球托霉菌属的部分18S片段。有益效果：将其应用于球托霉菌鉴定中，可从混合DNA品中准确的扩增出球托霉菌的目的序列片段，减少了鉴定步骤、缩短了鉴定时间、提高了鉴定的准确性。
一种特异性引物及其霉菌鉴定中的应用

[发明专利]一种以黄浆水制备异黄酮苷元的方法-CN202310181024.0在审
发明人： 肖亚中;郑朦胧;张学成;房伟;方泽民;许可 -专利权人：安徽大学绿色产业创新研究院;安徽省人人福食品有限公司
申请日： 2023-02-24 - 公布日： 2023-06-02 - 主分类号： C12P17/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种以黄浆水制备异黄酮苷元的方法，采用有机溶剂逐步将黄浆水中异黄酮分离并加以回收利用。本发明包括以下步骤：S1将大豆黄浆水经萃取、离心得到异黄酮浸提液；S2在步骤S1得到的异黄酮浸提液经酶解、浓缩、萃取得到大豆异黄酮苷元溶液。本发明工艺流程简单，操作简便，成本低，易于实现工业化。
一种黄浆水制备异黄酮方法

[发明专利]一种真菌漆酶的过表达基因、菌株、菌株的构建方法及漆酶的表达方法-CN202310035238.7在审
发明人：刘娟娟;甘志伟;赵慧芳;方泽民;肖亚中 -专利权人：安徽大学
申请日： 2023-01-10 - 公布日： 2023-06-02 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：本发明公开了一种真菌漆酶的过表达基因、表达菌株、菌株的构建方法及漆酶的表达方法，真菌漆酶的过表达基因以egfp‑skn7过表达片段替换灰盖鬼伞菌株的lcc1编码区，获得所述真菌漆酶的过表达基因，以提高漆酶的酶活。改造后的灰盖鬼伞菌株具有真菌漆酶的过表达基因，可在与球托霉菌w5共培养0h漆酶总酶活达190U/L，是野生型菌株的30倍；共培养36h酶活达到最高点，较野生型菌株酶活48h达到最高点时间提前了12h，且最高酶活提高1.5倍；在kjakle培养基中培养，加1mMCu2+诱导，漆酶总酶活可达到8000U/L，是野生型菌株的5倍，该菌株具备高效表达漆酶的特点。
一种真菌表达基因菌株构建方法

[发明专利]一种漆酶突变体、其编码基因、表达菌株及其应用-CN202310318953.1在审
发明人：房伟;刘帅峰;张学成;肖亚中 -专利权人：安徽大学
申请日： 2023-03-29 - 公布日： 2023-05-30 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种漆酶突变体、其编码基因、表达菌株及其应用。本发明以粗毛栓菌(Trametessp.)的漆酶LacB为出发搜索同源序列、分析其进化关系、通过祖先序列重建，获得突变基因。含有突变基因的工程菌诱导表达后，获得比酶活提高且稳定性提升的漆酶突变体LacANC，突变体的比酶活提高了3.5倍。在比活力提高的同时，突变体的稳定性提升了20倍，该突变体在氧化转化黄曲霉毒素B1中具有潜在应用价值。
一种突变体编码基因表达菌株及其应用

[发明专利]一种酰基辅酶A合成酶突变体、其编码基因、表达菌株及其应用-CN202211375350.7在审
发明人：房伟;章文霞;杨孝宇;张学成;肖亚中 -专利权人：安徽大学
申请日： 2022-11-04 - 公布日： 2023-05-05 - 主分类号： C12N9/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种酰基辅酶A合成酶突变体、其编码基因、表达菌株及其应用，本发明以来自海洋未培养微生物来源的酰基辅酶A合成酶为基础，通过Funclib设计突变位点后全基因合成，获得突变基因。含有突变质粒的工程菌诱导表达后，获得比酶活提高且稳定性提升的酰基辅酶A合成酶。以棕榈酸为底物时，突变体的比酶活提高了4.4倍。在比活力提高的同时，突变体的稳定性也得到了提升，该突变体在酶法检测游离脂肪酸体外诊断试剂盒中具有潜在应用价值。
一种基辅合成突变体编码基因表达菌株及其应用

[发明专利]一种用于白酒糟处理的复合微生物菌剂及其使用方法-CN202211551948.7在审
发明人：方泽民;余磊;刘娟娟;肖亚中;谢国排 -专利权人：安徽大学
申请日： 2022-12-05 - 公布日： 2023-05-05 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于白酒糟处理的复合微生物菌剂及其使用方法，复合微生物菌剂包括嗜热鞘氨醇杆菌、苏旺假黄单胞菌和贝莱斯芽孢杆菌，该复合微生物菌剂适用于接种于待处理的白酒糟中降解白酒糟。
一种用于白酒处理复合微生物及其使用方法

[发明专利]一种高效安全的抗菌肽变体及其应用-CN202310111008.4在审
发明人：张学成;盛海潮;吕孟琪;张寅良;房伟;肖亚中 -专利权人：安徽大学
申请日： 2023-02-14 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： C07K14/46 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效安全的抗菌肽变体及其应用，以天然抗菌肽Uperin3.6序列(如序列SEQNO:1所示)为基础，通过用碱性氨基酸精氨酸替换其无序N端区段；重复两个淀粉样C端序列并在其两端各加上3个精氨酸；以及在重复的两个淀粉样C端序列之间插入四氨基酸序列DPDG(DPDG具有形成β‑turn结构的最大倾向性)并在其两端各加上3个精氨酸。本发明抗菌肽能够提升抗菌肽的活性和安全性，对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有较好的抗菌性能，本发明的抗菌肽作为新型抗菌剂具有广泛的应用前景。
一种高效安全抗菌变体及其应用

[发明专利]一种高效表达生淀粉α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌重组菌及其应用-CN202210914414.X在审
发明人： 肖亚中;李鹤;姚动邦;方泽民;房伟 -专利权人：安徽大学
申请日： 2022-08-01 - 公布日： 2023-03-31 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效表达生淀粉α‑淀粉酶的枯草芽孢杆菌重组菌及其应用。本发明枯草芽孢杆菌重组菌以pBHSS142为表达载体、以来源于Pontibacillussp.ZY的生淀粉α‑淀粉酶基因为目的基因、以枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)WB600为表达宿主，在目的基因的上游插入了信号肽基因，改造了启动子、5'非翻译区序列和近端编码序列。利用本发明枯草芽孢杆菌重组菌可高效表达α‑淀粉酶，以其为生产菌株，摇瓶发酵48h，可将发酵液中α‑淀粉酶的酶活提高至2974U/mL。
一种高效表达淀粉淀粉酶枯草芽孢杆菌重组及其应用

[发明专利]一种利用白酒糟栽培平菇的方法-CN202211551269.X在审
发明人：刘娟娟;吴杨慧;余磊;方泽民;肖亚中;高学志 -专利权人：安徽大学
申请日： 2022-12-05 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： A01G18/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用白酒糟栽培平菇的方法，该方法将白酒糟、玉米芯、生石灰搅拌混匀并调节含水量，接种复合微生物菌剂发酵后调节发酵材料的pH至8～10，含水量60％～70％；将发酵材料装袋灭菌后接种5％～20％的平菇栽培种，控温20℃～25℃，相对湿度为60％～70％的条件下，培养20～30天，能有效降低平菇栽培料成本，同时提升平菇栽培的经济效益。
一种利用白酒栽培方法

[发明专利]一种漆酶定向进化方法及突变漆酶基因、表达载体、重组菌株及其脱毒黄曲霉毒素应用-CN202210661906.2在审
发明人：方泽民;彭齐霞;刘娟娟;肖亚中 -专利权人：安徽大学
申请日： 2022-06-13 - 公布日： 2022-08-12 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本发明涉及生物工程技术领域，公开了一种漆酶定向进化方法及突变漆酶基因、表达载体、重组菌株及其脱毒黄曲霉毒素应用，所述漆酶的氨基酸序列如SEQ ID No:1所示，所述SEQ ID No:1中第235位氨基酸由Ser变为Pro得到突变漆酶，所述突变漆酶的氨基酸序列如SEQ ID No:3所示。本发明的有益效果在于：本发明以在Pichiapastoris中异源表达的漆酶为基础，通过定点饱和突变，并在P.pastoris中异源表达突变漆酶基因，构建了一个“小而精”的饱和突变体文库；最终通过筛选获得了一株重组毕赤酵母突变菌株，其发酵产生的酶蛋白脱毒AFB1的效率提升至1.34倍，突变体蛋白可应用于生物乙醇制备过程中干酒糟及其可溶物(DDGS)中AFB1的同步脱毒。
一种定向进化方法突变基因表达载体重组菌株及其脱毒黄曲霉毒素应用

[发明专利]突变的核酸、表达载体和制备高比活力漆酶突变体及其方法-CN202110280063.7有效
发明人：方泽民;沈琛;肖亚中;彭齐霞 -专利权人：安徽大学
申请日： 2021-03-16 - 公布日： 2022-06-14 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：本发明公开了突变的核酸、表达载体和制备高比活力漆酶突变体及其方法，该突变的核酸的序列如SEQ IDNO：1所示；本发明通过ep‑PCR技术快速获取突变漆酶基因，以形成庞大的突变体文库；同时在蛋白N‑末端构建组氨酸标签，便于后续利用标签进行突变体菌株的高通量筛选，实现了漆酶基因在毕赤酵母中的异源表达和改造，重组毕赤酵母突变菌株酶蛋白的比活力提高约2倍，降低该漆酶的使用成本，提升重组毕赤酵母菌的工业应用潜力。
突变核酸表达载体制备活力突变体及其方法

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