本发明涉及一种孕马尿天然结合雌激素的快速提纯和产业化生产方法。提存方法包括步骤:将孕马尿经静置沉降处理和离心沉降处理,过滤并收集滤液,得到处理液,之后将处理液进行富集;将富集后的产物进行吸附处理,之后在室温下先水洗,后甲醇洗脱,收集洗脱液;将洗脱液采用旋转蒸发仪进行减压真空浓缩,之后经真空干燥箱干燥,得到结合雌激素。本发明采用MCI GEL CSP50/P10大孔树脂法进行孕马尿中天然结合雌激素的提取分离,不仅能够有效克服传统方法中吸附容量低、产品纯度低、回收率低等不足,而且该法工艺简单、成本低廉、易于工业化生产;且提取得到的结合雌激素有效成分保留多,具有优异的治疗和预防骨质疏松症等功效。