本发明公开了一种表达非洲猪瘟病毒p30蛋白的重组PRRSV载体、PRRSV重组病毒及其构建方法和应用,属于生物技术领域,以PBR322作为基础载体,包括PRRSV基因组全长cDNA序列和p30蛋白基因序列,PRRSV基因组全长cDNA序列如SEQ ID No.1所示,p30蛋白基因序列插入到PRRSV基因组全长cDNA序列的ORF1b和ORF2a之间的区域,在插入p30蛋白基因序列的PRRSV基因组全长cDNA序列的上游设置位于CMV启动子,即得到表达非洲猪瘟病毒p30蛋白的重组PRRSV载体。该重组载体保真度高,构建便捷效率高。
本发明公开了一种PRRSV基因组全长cDNA全长质粒、PRRS病毒及其构建方法和应用,属于生物技术领域,以PBR322作为基础载体,包括PRRSV基因组全长cDNA序列和CMV启动子序列,bGH poly(A)signal序列,CMV启动子序列设置在PRRSV基因组全长cDNA序列的上游,bGH poly(A)signal序列设置在PRRSV基因组全长cDNA序列的下游,PRRSV基因组全长cDNA全长质粒为pBR322‑CMV‑rJXA1R,其序列如如SEQ ID No.1所示。该PRRSV基因组全长cDNA全长质粒保真度高,构建便捷效率高。
本发明属于兽用生物制品技术领域,公开了一种禽流感与禽腺病毒4型二联基因工程亚单位疫苗,所述的疫苗中的抗原为融合抗原;所述的融合抗原具有:a)禽流感病毒HA蛋白;b)禽腺病毒fiber2蛋白;c)位于所述的禽流感病毒HA蛋白和禽腺病毒fiber2蛋白之间的特异性连接肽;所述的特异性连接肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。本疫苗中含有融合抗原,该融合能够诱导家禽产生高水平的特异性抗体,保护家禽免受禽流感和禽腺病毒的感染,同时本发明还公开了该疫苗的制备方法。
本发明属于兽用生物制品技术领域,公开了一种融合基因,碱基序列如序列表SEQ ID NO:1所示;该融合基因采用禽流感H9亚型HA基因、腺病毒4型fiber2基因、特异性连接肽片段基因进行融合,该基因对应的表达蛋白抗原能够诱导家禽产生高水平的特异性抗体,保护家禽免受禽流感和禽腺病毒的感染,同时,本发明还公开了一种重组表达载体、抗原及其制备方法和应用。
本发明属于生物领域,公开了一种基于无缝克隆技术的H9N2亚型禽流感病毒的拯救方法,包括如下步骤:步骤1:提取H9N2亚型禽流感病毒的RNA,并根据RNA获得病毒的cDNA;步骤2:以cDNA为模板采用8对引物扩增得到H9N2亚型禽流感病毒8个片段的PCR产物;步骤3:将PHW2000质粒进行酶切得到线性化片段;步骤4:将H9N2亚型禽流感病毒8个片段的PCR产物分别与线性化的PHW2000载体进行同源重组得到8种重组质粒;步骤5:将8种重组质粒共同转染293T及MDCK混合培养细胞,得到重组的H9N2病毒;其中,8对引物的序列分别为如序列表SEQ ID NO:2至SEQ ID NO:17所示。该方法的优势在于:操作简单、重组精确、拯救效率高。
本发明属于基因工程技术领域,公开了一种pSFV‑p54复制子颗粒及其制备方法与应用。所述pSFV‑p54复制子颗粒的制备方法,包括以下步骤:(1)以pSFV‑sp6‑EGFP质粒和flag‑p54基因为材料,构建得到pSFV‑sp6‑p54质粒;所述flag‑p54基因如SEQ ID NO:1所示;(2)分别将SFV‑helper辅助质粒和所述pSFV‑sp6‑p54质粒线性化并进行体外转录,将所得mRNA共电转入BHK细胞或Vero细胞中,得到pSFV‑p54复制子颗粒。本发明通过以塞姆利基森林病毒为载体,插入非洲猪瘟p54基因,所制得的pSFV‑p54复制子颗粒能够高效表达非洲猪瘟病毒p54蛋白,且具有较高的生物安全性,可应用于研制非洲猪瘟相关疫苗。
本发明公开一种猫桎首蚤跳蚤唾液过敏原FSA1的表达方法,包括以下步骤:1)使用如SEQ ID No.1和PCR SEQ ID No.2所示的引物对进行PCR扩增;2)构建原核表达载体;3)筛选;4)诱导表达;5)纯化和6)复性。该方法各步骤操作简单,快速高效,是一种针对跳蚤唾液过敏原FSA1原核表达蛋白的纯化工艺,该工艺克服了已有工艺复性后复性浓度小,蛋白易聚集的缺陷,并且大大提高生产效率,降低生产成本,适合工业化大规模生产。