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[发明专利]鲇生长激素与穿肠膜肽TAT融合蛋白及制备方法和应用-CN201210188435.4有效
发明人：孟小林;徐进平;王健;于京佑 -专利权人： 武汉凯肽来生物科技有限公司
申请日： 2012-06-08 - 公布日： 2013-01-30 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明公开了一种鲇生长激素与穿肠膜肽TAT融合蛋白及制备方法和应用，特别是对于促进硬骨鱼类的生长和耐渗透压上的应用。融合蛋白的制备方法是从活鲇的脑垂体中提取RNA，然后经过RT-PCR获得包含编码GH基因成熟肽的cDNA片段,将GH与TAT连接后连入表达载体pET22b(+),在大肠杆菌表达菌株BL21（DE3）中进行表达,获得的纯化融合蛋白通过投喂，注射或是浸泡等方式都能不同程度的提高鱼体生长速率，增强盐水的耐受能力。本发明相比于单纯的使用GH表达蛋白应用于鱼体，效果更佳。
生长激素穿肠膜肽 tat 融合蛋白制备方法应用

[发明专利]一种促进黄鳝生长的口服重组蛋白TAT-GH及制备方法和应用-CN201210190098.2有效
发明人：孟小林;徐进平;王健;周莉 -专利权人： 武汉凯肽来生物科技有限公司
申请日： 2012-06-08 - 公布日： 2012-11-07 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明公开了一种促进黄鳝生长的口服重组蛋白TAT-GH及制备方法和应用。一种促进黄鳝生长的口服重组蛋白的制备方法，其步骤是：A、根据已知序列人工合成黄鳝GH基因；B、通过PCR的方法扩增蛋白转导结构域多肽TAT，并将其与GH基因融合；C、双酶切TAT-GH融合基因和质粒，胶回收含TAT-GH基因的片段和开环片段，得到TAT-GH质粒；D、将质粒转化到感受态BL21（DE3）中，所得阳性克隆即为目的菌株。E、分离纯化目的菌株表达的蛋白。纯化后的TAT-GH重组蛋白经口服方式能有效促进黄鳝生长，为制备TAT介导的口服重组蛋白制剂提供了依据。
一种促进黄鳝生长口服重组蛋白 tat gh 制备方法应用

[发明专利]罗非鱼重组口服蛋白TAT-GH及制备方法和应用-CN201210189101.9有效
发明人：孟小林;徐进平;王健;曾辉 -专利权人： 武汉凯肽来生物科技有限公司
申请日： 2012-06-08 - 公布日： 2012-10-03 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明公开了一种罗非鱼重组口服蛋白TAT-GH及制备方法和应用。从雄性罗非鱼的脑垂体中提取总mRNA，通过RT-PCR得到cDNA，再通过PCR扩增获得罗非鱼生长激素GH的基因，PCR重叠延伸的方法扩增TAT-GH基因；构建重组质粒pET-32a（+）-TAT-GH。将重组质粒pET-32a（+）-TAT-GH转化大肠杆菌BL21（DE3），在IPTG诱导下，融合蛋白TAT-GH以包涵体的形式得到高效表达，再通过纯化复性得到活性蛋白，喂食罗非鱼幼苗后能有效地促进其生长发育。
罗非鱼重组口服蛋白 tat gh 制备方法应用

[发明专利]一种基因工程口服DNA疫苗及制备方法和应用-CN201110367094.2有效
发明人：孟小林;徐进平;王健 -专利权人： 武汉凯肽来生物科技有限公司
申请日： 2011-11-18 - 公布日： 2012-03-28 - 主分类号： A61K48/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种基因工程口服DNA疫苗及制备方法和应用，其步骤：A、鲤鱼生长激素成熟肽基因的制备：用鲤鱼脑垂体，提取其总mRNA后，通过RT-PCR得到总cDNA，设计并合成引物；B、融合基因sgh的制备；C、融合基因真核表达载体的构建：用限制性内切酶NheI,　XhoI双酶切pGEM-T-SGH和pcDNA3.1（-），胶回收开环质粒pcDNA3.1（-）和SGH基因的片段，连接后转化到感受态JM109中，得到阳性克隆子为JM109/pcDNA3.1(-)--signal-GH；D、质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌：将质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SalmonellatyphimuriumW0420感受态细胞中，得菌株SalmonellatyphimuriumW0420/pcDNA3.1(-)--signal-GH，为口服DNA疫苗。易于工业化生产，操作简单，成本低，安全性好。该疫苗具有转运促生长的DNA疫苗到克氏螯虾体内的能力，该DNA疫苗能够明显促进克氏螯虾幼虾生长；具有水产养殖业的应用前景。
一种基因工程口服 dna 疫苗制备方法应用

[发明专利]一种克氏原螯虾C-型凝集素基因及制备方法和应用-CN201110217937.0有效
发明人：孟小林;徐进平;王健;张清涛 -专利权人： 武汉凯肽来生物科技有限公司
申请日： 2011-08-01 - 公布日： 2012-01-18 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种克氏原螯虾C-型凝集素基因及制备方法和应用，步骤是：A、总RNA的提取；B、cDNA第一链的合成；C、部分核苷酸序列的获得；D、3’-RACE：3’端核苷酸序列的获得；E、5’-RACE：5’端核苷酸序列的获得；F、基因完整核苷酸序列的获得；G、C-型凝集素基因所编码的蛋白质的氨基酸序列。从克氏原螯虾中克隆到C-型凝集素基因。将该基因克隆入pET-28a载体，在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出重组蛋白mClec，纯化的mClec对多种细菌及兔红细胞表现凝集作用。该蛋白mClec，或将凝集素基因克隆原核表达载体获得的重组凝集素，可用于生产虾类和鱼类抗病毒、抗细菌药物。
一种克氏原螯虾凝集素基因制备方法应用

[发明专利]抗对虾白斑综合症病毒工程蛋白TAT-VP28及制备和用途-CN201010572930.6有效
发明人：孟小林;徐进平;王健;张毅;宁建芳 -专利权人： 武汉凯肽来生物科技有限公司
申请日： 2010-12-03 - 公布日： 2011-10-05 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗对虾白斑综合症病毒工程蛋白TAT-VP28及制备和用途。其序列为SEQIDNO：1所示的核苷酸和SEQIDNO：2所示的氨基酸序列，菌株为重组基因工程菌株EscherichiacoliBL21(pET-28a-TAT-VP28)。从对虾虾体中提取WSSV并通过PCR获得VP28基因，通过PCR的方法扩增TAT-VP28序列，然后构建重组质粒pET-28a（+）-TAT-VP28。将重组质粒pET-28a（+）-TAT-VP28转化大肠杆菌BL21（DE3）。基因工程融合蛋白在制备治疗或预防对虾白斑综合症病毒的药物中的应用。表达量大且可溶，易于工业化生产，成本低，安全性好。在预防对虾白斑综合症上有更高，更长的保护效果。
对虾白斑综合症病毒工程蛋白 tat vp28 制备用途