本发明属于病毒检测技术领域,公开了一种羊病病毒多重PCR检测引物、方法及应用,羊口蹄疫病毒的引物FMDV‑F的碱基序列为SEQ ID NO:1,FMDV‑R的碱基序列为SEQ ID NO:2;羊口疮病毒的引物ORFV‑F的碱基序列为SEQ ID NO:3,ORFV‑R的碱基序列为SEQ ID NO:4;山羊痘病毒的引物GTPV‑F的碱基序列为SEQ ID NO:5,GTPV‑R的碱基序列为SEQ ID NO:6。本发明通过对多重PCR进行优化,确定最佳反应体系和最佳反应程序,本发明可以准确检测出羊口蹄疫病毒、羊口疮病毒、山羊痘病毒的单一或混合感染,在流行病学调查和疫病防控方面具有重要作用。