本发明公开了一种人轮状病毒毒株、分离培养方法、鉴定及用途,本发明所述人轮状病毒毒株为A组G2P4型病毒毒株,其保藏编号为CGMCC NO.45085;包括如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列;包括如SEQ ID NO:12至SEQ ID NO:22所示的核苷酸序列。人轮状病毒毒株的分离培养方法中,进行轮状病毒激活时,胰酶的浓度为15μg/mL;维持液中胰酶浓度为15μg/mL‑20μg/mL。本发明分离到一种G2P[4]型轮状病毒流行株,为进一步研究其生物学特性奠定了基础,可用于制备预防和/或治疗由轮状病毒诱发的疾病的疫苗或药物或诊断试剂。