本发明属于基因测序领域,具体涉及一种FH测序文库的构建方法和引物组及试剂盒。该FH测序文库的构建方法,包括如下步骤:获得DNA样本;利用第一引物集和第二引物集分别对DNA样本进行多重PCR扩增,分别得到第一扩增产物和第二扩增产物;将第一扩增产物和第二扩增产物混合,得到混合产物;利用测序接头引物对混合产物进行扩增,得到测序文库;其中,所述第一引物集的序列如SEQ ID NO.1‑130所示;所述第二引物集的序列如SEQ ID NO.131‑260所示。该FH测序文库的构建方法,具有高检测覆盖度和高均一性、样本消耗量少、样本要求低和大量节省检测成本的优点,并能为临床发现新发基因突变提供技术基础。