本发明提出了一种底物亲和力强、催化效率高的AusMan5A-TviCBM融合酶的设计与构建的方法,其核苷酸序列为SEQ ID NO:1,氨基酸序列为SEQ ID NO:2,相应的基因命名为man5A-cbm。本发明还公开了融合酶工程菌的构建以及高效表达和纯化的方法,制备的融合酶具有底物亲和力强、催化效率高的特性,具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
本发明提出了一种源自米曲霉(Aspergillus oryzae)CICC 40186的新型10家族木聚糖酶催化域基因cDNA序列的克隆及分析、质粒构建及表达方法,其核苷酸序列为SEQ ID NO:1。生物信息学分析表明该木聚糖酶催化域属于糖苷水解酶第10家族,命名为Aor Xyn10BC,其氨基酸序列为SEQ ID NO:2,相应的基因命名为Aor xyn10BC。这为该基因的异源表达和工业化生产奠定了理论基础。本发明还公开了木聚糖酶工程菌的构建以及重组木聚糖酶的高效表达和纯化的方法。作为一种新型酶制剂,该木聚糖酶具有较大的工业化生产和应用潜力及经济价值,也为其它木聚糖酶的研究奠定了理论基础。
本发明提出了一种源自米曲霉(Aspergillus oryzae)CICC 40186的新型10家族木聚糖酶基因完整mRNA和DNA序列的克隆方法及分析,其核苷酸序列分别为SEQ IDNO:1和SEQ ID NO:2。生物信息学分析表明该木聚糖酶属于糖苷水解酶第10家族,命名为Aor Xyn10B,其氨基酸序列为SEQ ID NO:3,相应的基因命名为Aor xyn10B。这为该基因的异源表达和工业化生产奠定了理论基础。作为一种新型酶制剂,该木聚糖酶具有较大的工业化生产和应用潜力及经济价值,也为其它木聚糖酶的研究奠定了理论基础。
本发明提出了一种通过计算机技术与生物信息学相结合的手段获得耐热杂合木聚糖酶EvAus Xyn11A的方法,其核苷酸和氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。本发明公开了利用分子动力学模拟理性设计耐热杂合基因的方法,并通过重叠PCR获得了这一杂合基因EvAus xyn11A;此外本发明还公开了EvAus Xyn11A工程菌的构建以及重组EvAus Xyn11A异源表达的方法,制备的重组EvAus Xyn11A的最适作用温度60℃,具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
本发明提出了一种源自黑曲霉(Aspergillus niger)LW-1菌株的新型的酸性β-甘露聚糖酶基因完整mRNA和DNA序列的克隆方法,其核苷酸序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。生物信息学分析表明该木聚糖酶属于糖苷水解酶第5家族,命名为An Man5A,其氨基酸序列为SEQ ID NO:3,相应的基因命名为An man5A。本发明还公开了An Man5A工程菌的构建以及重组GS115/man5A的高效表达和纯化的方法,制备的重组Man5A的最适作用温度和pH分别为70℃和4.0,在pH 2.5-7.5、60℃以下稳定,具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
本发明提出了一种源自绿色木霉(Trichoderma viride)WL 0422的新型β-甘露聚糖酶基因序列的克隆方法,其核苷酸序列为SEQ ID NO:1。生物信息学分析表明该β-甘露聚糖酶属于糖苷水解酶第5家族,命名为Tvi Man5A,其氨基酸序列为SEQ ID NO:2,相应的基因命名为Tvi man5A。本发明还公开了β-甘露聚糖酶工程菌的构建以及重组β-甘露聚糖酶的高效表达和纯化的方法,制备的重组β-甘露聚糖酶的最适作用温度和pH分别为70℃和3.5,在pH3.0-7.0、60℃以下稳定,具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
本发明提出了一种源自宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001菌株的新型壳聚糖酶基因完整mRNA和DNA序列的克隆方法,其核苷酸序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。生物信息学分析表明该壳聚糖酶属于糖苷水解酶第75家族,命名为Aus CsnA,其氨基酸序列为SEQ ID NO:3,相应的基因命名为Aus csnA。本发明还公开了Aus CsnA工程菌的构建以及重组Aus CsnA的高效表达和纯化的方法,制备的重组Aus CsnA的最适作用温度和pH分别为50℃和5.0,在pH 4.0-7.0、50℃以下稳定,具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
本发明提出了一种源自宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的新型β-甘露聚糖酶基因完整mRNA和DNA序列的克隆方法,其核苷酸序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。生物信息学分析表明该β-甘露聚糖酶属于糖苷水解酶第5家族,命名为Aus Man5A,其氨基酸序列为SEQ ID NO:3,相应的基因命名为Aus man5A。本发明还公开了β-甘露聚糖酶工程菌的构建以及重组β-甘露聚糖酶的高效表达和纯化的方法,制备的重组β-甘露聚糖酶的最适作用温度和pH分别为75℃和3.5,在pH 3.0-7.0、70℃以下稳定,具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
本发明提出了一种源自宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001菌株的新型β-1,4-内切木聚糖酶基因完整mRNA和DNA序列的克隆和分析方法,其核苷酸序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。生物信息学分析表明该β-1,4-内切木聚糖酶是在A.usamii E001中发现的第三种11家族的木聚糖酶,所以命名为Aus Xyn11C,其氨基酸序列为SEQ ID NO:3,相应的基因命名为Aus xyn11C。这为该基因的异源表达和工业化生产奠定了理论基础,有较大的工业化生产和应用潜力及经济价值,也为其它β-1,4-内切木聚糖酶的研究奠定了理论基础。